[发明专利]一种红花中化学成分鉴定的方法

权利要求书

1.一种红花中化学成分鉴定的方法，所述方法包括：

制备5-20mg/mL的待测样品溶液，溶剂为0-100vol％甲醇水溶液；

通过超高效液相色谱-离子淌度-四级杆飞行时间质谱，获得各化学成分的保留时间、母离子质荷比、二级碎片离子质荷比、母离子碰撞截面值；

其中，超高效液相色谱的色谱条件包括：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

流动相：A相为体积分数为0.05-0.15％的甲酸水溶液，B相为乙腈；采用体积分数5-99％A相，1-95％B相，梯度洗脱；柱温：20-45℃；流速：0.2-0.4mL/分钟；进样量V₁：2-5μL；

离子淌度-四级杆飞行时间质谱的质谱条件包括：

采用电喷雾离子源，以负离子检测作为检测模式，质谱参数为：

喷雾电压为-0.5～-1kV；锥孔电压为20-120V；脱溶剂气体流量为700-900L/h；锥孔气体流量为40-60L/h；毛细管温度为100-140℃；辅助气加热温度为450-550℃；一级碰撞能量为4-8eV；高清MS^E二级碰撞能量为20-100eV；数据依赖性采集二级碰撞能量为10-70eV；扫描范围为50-1500m/z；数据依赖性采集一级响应前N强离子的二级信息，其中，3≤N≤10，触发二级采集的母离子强度阈值为1300计数停止二级采集的阈值为500计数或时间超过0.4s；

基于各化学成分的保留时间、母离子质荷比、二级碎片离子质荷比、母离子碰撞截面值，确定待测样品中的化学成分。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述溶剂为30-80vol％的甲醇水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述梯度洗脱具体为：0-4分钟，1-13％B相；4-9分钟，13-16％B相；9-11分钟，16-19％B相；11-16分钟，19-26％B相；16-19分钟，26-35％B相；19-23分钟，35-45％B相；23-24分钟，45-95％B相；24-26分钟，95％B相。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述色谱柱选自HSS T3、CSH Phenyl-Hexyl、CSHC18、BEH Shield RP18、BEH C18、CORTECS UPLC C18+、Kinetex Biphenyl、Zorbax ExtendC18、Zorbax Eclipse Plus C18或Zorbax SB-Aq，柱温为25-40℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，将获得的待测样品中化学成分的保留时间、母离子质荷比、二级碎片离子质荷比、母离子碰撞截面值，与已知红花成分的保留时间、母离子质荷比、二级碎片离子质荷比、母离子碰撞截面值进行比对，确定待测样品的化学成分。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述已知红花成分包括脱水红花黄色素B、羟基红花黄色素A、6-羟基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷、芦丁、山柰酚-3-O-芸香苷、槲皮素、异槲皮素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、杨梅素、(2S)-4’,5,6,7-四羟基二氢黄酮-6-O-β-D-葡萄糖苷、咖啡酸、对香豆酸、腺苷。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述已知红花成分的保留时间、母离子质荷比、二级碎片离子质荷比、母离子碰撞截面值是按照以下过程获得的：

制备5-20μg/mL的所述已知红花成分的标准品溶液，溶剂为0-100vol％甲醇水溶液；

通过超高效液相色谱-离子淌度-四级杆飞行时间质谱，获得所述红花成分的保留时间、母离子质荷比、二级碎片离子质荷比、母离子碰撞截面值；

其中，超高效液相色谱的色谱条件包括：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

流动相：A相为体积分数为0.05-0.15％的甲酸水溶液，B相为乙腈；采用体积分数5-99％A相，1-95％B相，梯度洗脱；柱温：20-45℃；流速：0.2-0.4mL/分钟；进样量V₁：2-5μL；

离子淌度-四级杆飞行时间质谱的质谱条件包括：

采用电喷雾离子源，以负离子检测作为检测模式，质谱参数为：

喷雾电压为-0.5～-1kV；锥孔电压为20-120V；脱溶剂气体流量为700-900L/h；锥孔气体流量为40-60L/h；毛细管温度为100-140℃；辅助气加热温度为450-550℃；一级碰撞能量为4-8eV；高清MS^E二级碰撞能量为20-100eV；数据依赖性采集二级碰撞能量为10-70eV；扫描范围为50-1500m/z；数据依赖性采集一级响应前N强离子的二级信息，其中，3≤N≤10，触发二级采集的母离子强度阈值为1300计数，停止二级采集的阈值为500计数或时间超过0.4s。