[发明专利]一种低成本小鼠肠类器官培养基及培养方法在审
申请号: | 202010719320.8 | 申请日: | 2020-07-23 |
公开(公告)号: | CN111909889A | 公开(公告)日: | 2020-11-10 |
发明(设计)人: | 黄敏;徐丛;李刚 | 申请(专利权)人: | 创芯国际生物科技(广州)有限公司 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071 |
代理公司: | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人: | 颜希文 |
地址: | 510000 广东省广州*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 低成本 小鼠 器官 培养基 培养 方法 | ||
1.一种低成本小鼠肠类器官培养基,其特征在于,包含基础培养基和293T-HA-Rspo1-Fc细胞上清。
2.根据权利要求1所述小鼠肠类器官培养基,其特征在于,所述基础培养基为DEME/F12培养基。
3.根据权利要求1所述小鼠肠类器官培养基,其特征在于,所述基础培养基与293T-HA-Rspo1-Fc细胞上清的重量比为70~95:5~30。
4.根据权利要求1所述小鼠肠类器官培养基,其特征在于,还包含以下成分:
无维生素A型B27 2%~10%;
乙酰半胱氨酸酰胺0.2~5μmol/L;
前列腺素E2 0.1~1μmol/L;
小鼠表皮生长因子10~100ng/mL;
选择性小分子抑制剂A83-01 1~10mol/L;
ROCK抑制剂Y27632 5~50μmol/L;
胃泌素I 5~50ng/mL;
青霉素100~500U/mL;
链霉素100~500μg/mL;
两性霉素B 0.5~5μg/mL。
5.一种小鼠肠类器官的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取小鼠肠预处理,离心去除上清,得到细胞团沉淀;
(2)取所述小鼠肠类器官培养基与基质胶制得混合液,然后用混合液重悬步骤(1)得到的细胞团沉淀,并转移到培养皿中;
(3)将步骤(2)中的培养皿放入CO2培养箱中培养;
(4)在步骤(3)中的培养皿中加入所述小鼠肠类器官培养基,恒温培养;
(5)定期更换培养基,最终得到小鼠肠类器官。
6.根据权利要求5所述小鼠肠类器官的培养方法,其特征在于,所述基质胶为Matrigel基质胶。
7.根据权利要求6所述小鼠肠类器官的培养方法,其特征在于,所述步骤(4)中恒温培养为在37℃、5%CO2条件下进行培养。
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