[发明专利]一种低成本小鼠肠类器官培养基及培养方法

说明书

本发明涉及一种低成本小鼠肠类器官培养基及培养方法，属于细胞生物技术领域。本发明的小鼠肠类器官的培养基，主要包括基础培养基、293T‑HA‑Rspo1‑Fc细胞上清及添加剂。小鼠肠类器官的培养方法包括以下步骤：小鼠肠预处理制备细胞团；用小鼠肠类器官培养基与基质胶混合液重悬细胞团；将细胞团接种到培养基中进行培养。本发明培养基中添加的细胞因子均为鼠源，更接近体内正常生长状态，有利于类器官的生长于形态结构维持。此外，使用了293T‑HA‑Rspo1‑Fc细胞上清代替昂贵的细胞因子R‑Spondin 1，成本低廉，便于大规模生产。

技术领域

本发明属于细胞生物技术领域，具体涉及一种低成本小鼠肠类器官培养基及培养方法。

背景技术

人类应用小鼠模型进行生物学医学研究已有超过一百多年的历史。小鼠体型小、繁殖周期短、产仔数量多、容易饲养、遗传资源丰富；小鼠的基因与人类相似度达95％，拥有人类相似的免疫系统及易于进行基因工程与细胞工程的改造，这些优点决定了小鼠模型在生物学医学研究中心得天独厚的优势。然而，即便小鼠动物模型有诸多的优势，却依然存在建模流程繁杂、建模时间长、操作难度大、硬件要求高和建模成本高昂等缺点。

类器官是衍生于干细胞的体外3D培养物。类器官在细胞成分和组织架构上与对应器官高度相似，并具备相应的功能学特征。与常规细胞培养在二维环境中培养单一细胞类群不同，类器官培养是在三维环境中培养出特定组织器官包含的多种细胞类群，其培养体系与体内微环境更为相似。因此，在各种器官生理病理的基础研究、精准医疗、药物筛选和开发、基因治疗、再生医学等方面，显示出巨大的应用前景。类器官作为一种新的研究模型，可操作性好、适宜高通量筛选、培养成本低，能够在段时间内实现大批量生产，极大的弥补了小鼠模型的短板。

小鼠肠类器官主要用于肠道疾病如肠癌、肠道感染和肠道消化吸收功能的研究。虽然多种人源组织的类器官培养方法已有一些报道，但是目前关于小鼠肠类器官的培养方法的研究及报道很少。

发明内容

本发明的目的在于克服现有培养方法技术的不足，提供一种能够工业化生产、成本低廉的小鼠肠类器官培养基。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种小鼠肠类器官培养基，包含基础培养基和293T-HA-Rspo1-Fc细胞上清。

优选的，所述基础培养基为DEME/F12培养基。

优选的，所述基础培养基与293T-HA-Rspo1-Fc细胞上清的重量比为70～95：5～30。

DEME/F12含有较高浓度的营养成分以及多种微量元素，作为无血清配方的基础，适用于克隆密度的培养。

鼠源的293T-HA-Rspo1-Fc细胞上清内含多种细胞因子。添加293T-HA-Rspo1-Fc细胞上清使培养环境更接近体内正常生长状态，有利于类器官的生长于形态结构维持。此外，使用293T-HA-Rspo1-Fc细胞上清代替传统细胞因子能够大幅度降低成本。

优选的，所述小鼠肠类器官培养基，还包含以下含量的成分：

无维生素A型B27 2％～10％；

N-acetylcysteine 0.2～5μmol/L；

Prostaglandin E2 0.1～1μmol/L；

Mouse EGF 10～100ng/mL；

A83-01 1～10μmol/L；

Y27632 5～50μmol/L；

Gastrin I 5～50ng/mL；

青霉素100～500U/mL；