[发明专利]检测M型磷脂酶A2受体IgG4的免疫分析试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.检测M型磷脂酶A2受体IgG4的免疫分析试剂盒，其特征在于由以下部分：包被板(1)、分析缓冲液(2)、抗PLA2R自身抗体标准品(3)、铕标记的羊抗人IgG抗体(4)、浓缩清洗液(5)、增强液(6)和盒体(7)所组成。

2.如权利要求1所述的检测M型磷脂酶A2受体IgG4的免疫分析试剂盒，其特征在于所述包被板(1)的制备如下：包被板(1)包被固相PLA2R不同表位抗原(CysR或CTLD1或CTLD67或CTLD78或CTLD678)，用50mmol/L(pH9.6)Na2CO3-NaHCO3缓冲液将纯化的PLA2R不同表位抗原稀释至2.5μg/mL作为包被液，分别在96微孔板各孔中加100μL，4℃放置过夜；弃去包被液，用50mmol/L(pH9.6)Na2CO3-NaHCO3缓冲液洗涤3次；然后每孔加200μl含3g/LBSA的上述缓冲液封闭，4℃放置过夜，弃去封闭液，拍干后真空抽干，板条密封后置-20℃冷冻保存待用。

3.如权利要求1所述的检测M型磷脂酶A2受体IgG4的免疫分析试剂盒，其特征在于按质量百分比计所述分析缓冲液(2)的制备如下：取6.06g三羟甲基氨基甲烷和8.8gNaCl溶于去离子水中，用盐酸调节PH值为7.8，然后加入5gBSA、1g的NaN₃，随后加去离子水定容至1L，分装，置于2-8℃下保存即得。

4.如权利要求1所述的检测M型磷脂酶A2受体IgG4的免疫分析试剂盒，其特征在于抗PLA2R自身抗体标准品(3)的制备如下：通过初步实验，在膜性肾病患者中筛选出一个含高浓度Anti-PLA2R不同表位决定簇自身抗体的血清，将高浓度的抗PLA2R不同表位决定簇自身抗体血清用分析缓冲液稀释到系列浓度为标准品，0U/ml浓度点为分析缓冲液。

5.如权利要求1所述的检测M型磷脂酶A2受体IgG4的免疫分析试剂盒及其检测方法，其特征在于铕标记的抗人IgG4抗体(4)的制备方法如下：取抗人IgG4抗体lmg，采用超滤管转换缓冲条件至0.155moL/LNaCl的Na₂CO₃-NaHCO₃(50mmoL/L，pH8.5)缓冲液中，在含0.2mg的Eu³⁺-N₂-[p-异氰酸-苄基]-二乙烯三胺四乙酸(Eu³⁺-DTTA)冻干粉的小瓶中加入lmg/0.5ml的抗人IgG4抗体，25℃磁力搅拌反应20小时，反应液经用80mmoL/Ltris-HClpH7.8缓冲液平衡的SepharoseCL-6B柱(1×40cm)层析，采用DELFIA-1420时间分辨荧光免疫分析仪检测Eu³⁺荧光值，收集蛋白峰，用缓冲液稀释后分装冻干保存，抗人IgG4抗体可以列举但并不只限于羊抗人IgG4抗体、鼠抗人IgG4抗体、兔抗人IgG4抗体等。

6.如权利要求1所述的检测M型磷脂酶A2受体IgG4的免疫分析试剂盒，其特征在于洗涤液(5)的制备如下：14.5mmol/LNaCl、0.2mL/LTween-80和0.2％NaN₃的50mmol/LpH7.8的Tris-HCl。

7.如权利要求1所述的检测M型磷脂酶A2受体IgG4的免疫分析试剂盒，其特征在于增强液(6)的制备如下：体积浓度为3.6‰的冰醋酸，0.5g/L的醋酸钠，0.05g/L的β-萘甲酰三氟丙酮，0.03g/L的三辛基氧化膦和体积浓度为1‰的TritonX-100的混合溶液。