[发明专利]一种五倍子树多倍体育种方法

权利要求书

1.一种五倍子树多倍体育种方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对种质资源进行调查和收集，建立资源库

对收集的种质资源进行观察，对收集的种质的原五倍子树的花期、泌蜜量、花朵大小、抗逆性进行记录，建立分级标准，筛选出性状优良的二倍体五倍子树；

(2)预实验诱导剂浓度

根据步骤1)的筛选出的优良植株，取其健康种子及子叶期幼苗，进行预实验研究种子或幼苗对诱导剂的抗药性，得出大致的诱导剂的有效使用浓度范围及诱变处理时间范围。

(3)诱导剂诱导

(4)对步骤(3)经诱导处理后的培育的植株采用流式细胞仪技术进行倍性鉴定；

(5)对步骤(4)经鉴定为多倍体的植株进行分离并进行繁育；

(6)对步骤(5)繁育的植株进行筛选，筛选出综合形状/特点突出的新品种；

(7)对步骤(6)筛选出的新品种进行遗传变异研究

①采用形态学初步鉴定方法对植株的变异情况进行观察；

②在显微镜下观察和测量花粉粒和气孔保卫细胞的长直径×宽直径，以及气孔数，分别测量20个细胞，取平均值；

③通过根尖、茎尖、嫩叶、花粉母细胞等分裂活跃部位的染色体数目判定植物的染色体条数；

④采用分子标记鉴定法中的RAPD技术来鉴定突变体嵌合体的比例，鉴定筛选出多倍体纯系材料。

2.根据权利要求1所述的一种五倍子树多倍体育种方法，其特征在于，所述诱导剂为氟乐灵、戊炔草胺和甲基胺草磷的其中一种或两种的混合。

3.根据权利要求1所述的一种五倍子树多倍体育种方法，其特征在于，步骤(2)中所得到的诱导剂的浓度范围为0.05％-0.4％，诱变时间范围为12h-48h。

4.根据权利要求3所述的一种五倍子树多倍体育种方法，其特征在于，所述诱导剂的浓度选取0.05％、0.1％、0.2％、0.4％，所述诱变时间选取12h、24h、48h。

5.根据权利要求4所述的一种五倍子树多倍体育种方法，其特征在于，步骤(3)中的诱导剂的诱导步骤包括：选取健康饱满的经过浓硫酸和层积处理后的种子，用不同浓度的诱导剂分别浸泡不同的时间，共计得到12种不同诱导剂与浸泡时间处理的种子，然后将种子蒸馏水清洗后采用基质育种进行培育，一个月后对培育的五倍子树的成活率及形态变异率进行统计。

6.根据权利要求4所述的一种五倍子树多倍体育种方法，其特征在于，步骤(3)中的诱导剂的诱导主要是选取优良种子播种，待幼苗子叶展开期用浸有诱导剂的溶液的脱脂棉球接触生长点，其具体的操作步骤包括：将制成适宜大小的脱脂棉球放置在两片子叶处，滴加不同浓度的诱导剂，在上午7：00-10：00与下午5:00～8：00各处理一次，每次滴加1-3滴，以溶液不滴落为宜，之后盖上塑料薄膜以保持药剂处理效果；诱导处理结束后用蒸馏水冲洗生长点处后，将幼苗继续进行培育，14天后统计成活率，一个月后统计形态变异率。

7.根据权利要求4所述的一种五倍子树多倍体育种方法，其特征在于，步骤(3)中的诱导剂的诱导步骤包括：1)将外植体经过常规消毒后在培养基上进行扩繁，以得到足够的材料；2)将无菌苗按节切下，取出2/3的叶片后浸泡于不同诱导剂溶液中，浸泡不同的时间，叶片在浸泡期间将其放置在摇床中震荡；3)浸泡结束后用无菌水将叶片漂洗3次后，将其转入繁殖培养基进行培育，一个月后培育的五倍子树的成活率及形态变异率进行统计。