[发明专利]用于鉴别平贝母的特异性PCR鉴别引物及其应用在审

专利信息
申请号: 202010721055.7 申请日: 2020-07-24
公开(公告)号: CN111826460A 公开(公告)日: 2020-10-27
发明(设计)人: 陈随清;杨灏;练从龙;张雪雨 申请(专利权)人: 河南中医药大学
主分类号: C12Q1/6895 分类号: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
代理公司: 郑州天阳专利事务所(普通合伙) 41113 代理人: 聂孟民
地址: 450046 河南*** 国省代码: 河南;41
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摘要:
搜索关键词: 用于 鉴别 贝母 特异性 pcr 引物 及其 应用
【说明书】:

发明涉及用于鉴别平贝母的特异性PCR鉴别引物及其应用,可有效解决平贝母鉴别的特异性引物,并用于对平贝母进行准确鉴别的问题,所述的PCR鉴别引物,为上游引物PB‑Y1F:5'CGGGCGGACAATTTACTT 3'和下游引物:PB‑Y1R:5'AGATAGAGAGCGGGCGTC 3'两条单链DNA分子组成的引物对,正向引物3'端最末端碱基位于122位缺失位点上,PCR扩增产物的大小为186bp;本发明提供的引物对可有效用于对平贝母的鉴定,检测方法易操作,简单、快捷、准确率高,能够有效应用于大批量平贝母的鉴定工作,确保平贝母的质量和药用价值,有显著的经济和社会效益。

技术领域

本发明涉及医药,特别是一种用于鉴别平贝母的特异性PCR鉴别引物及其应用。

背景技术

平贝母为百合科贝母属多年生植物平贝母 Fritillaria ussuriensis Maxim. 的干燥鳞茎。味苦,性寒。归肺、心经。功效为清热化痰,润肺止咳,开郁散结。用于治疗肺热咳嗽,烦热吐血、支气管炎等症。在现代平贝研究中已多篇文章报道,平贝母具有良好的生物活性且临床药效与川贝相似,是川贝母合适的替代品,并且其生长环境要求较低,人工种植技术比较成熟,生长周期短 (2~3年), 产量高,成本低。因此相对于自然资源透支过度、人工栽培困难、市场价格昂贵的川贝母,平贝母适应现今临床用药和市场需求量大的行业环境,有很强的发展前景。

中药材的准确快速鉴别是保证临床疗效和实验研究的重要环节之一,我国贝母属植物超过50种,15版中国药典共收录5大类贝母:川贝母、平贝母、伊贝母、浙贝母和湖北贝母,中国药典收录的川贝母的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法仅能区分川贝母及其他贝母,在实际应用中无法对其他贝母进行准确鉴定,存在鉴定不完全的弊端。目前对于平贝母分子鉴定的相关研究还未见报道。

DNA条形码(DNA barcoding)技术作为最新的分子鉴定技术有着其他分子标记无法比拟的优势。Santhosh Kumardeng等开发了印度苦瓜的DNA条形码,并且基于条形码序列建立了苦瓜的真伪鉴别方法。Nicole Ollinger等基于DNA条形码技术,设计8对组合引物,通过一次PCR反应完成了对米根霉和黑曲霉等不同菌种的鉴定。Ke Ran等使用细胞色素c氧化酶亚基I(COI)基因对腹足动物种类进行鉴定,并建立了可靠的中国海南岛腹足动物DNA条形码参考数据库。由此可见DNA条形码技术通用性强,操作简单,易形成统一标准。但利用特异性引物对平贝母进行鉴别至今未见有公开报导。

发明内容

针对上述情况,为克服现有技术之不足,本发明之目的就是提供一种用于鉴别平贝母的特异性PCR鉴别引物及其应用,可有效解决平贝母鉴别的特异性引物,并用于对平贝母进行准确鉴别的问题。

本发明解决的技术方案是,一种用于鉴别平贝母的特异性PCR鉴别引物,为上游引物PB-Y1F:5' CGGGCGGACAATTTACTT 3'和下游引物:PB-Y1R:5'AGATAGAGAGCGGGCGTC 3'两条单链DNA分子组成的引物对,正向引物3'端最末端碱基位于122位缺失位点上,PCR扩增产物的大小为186bp;

一种用于鉴别平贝母的特异性PCR鉴别引物鉴别平贝母的应用方法,包括以下步骤:

(1)、平贝母总DNA的提取:按照天根快捷性植物基因组DNA提取试剂盒说明书要求提取总DNA,使用超微量紫外分光光度计对所提DNA的浓度和吸光度A260/A280进行检测,所得DNA 样本在-20℃ 条件下保存,备用;

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