[发明专利]基于点击反应的ROS响应型肝素类多糖纳米前药复合物、纳米制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.基于点击反应的ROS响应型肝素类多糖纳米前药复合物，其特征在于，所述纳米前药复合物以亲水性肝素类多糖为基体，经功能化后通过点击反应共价偶联经草酸酯键修饰得到ROS敏感键的疏水性抗肿瘤药物、共价结合靶向配体；其中，肝素类多糖、疏水性抗肿瘤药物及靶向配体的摩尔比为1:0.1-0.9:0.9-0.1，且疏水性抗肿瘤药物为摩尔比为1:0-20的疏水性药物a和疏水性药物b；所述复合物由以下方法制得：所述方法首先以亲水性肝素类多糖为基体，通过酰胺化反应或酯化反应得到功能化肝素类多糖，同时，将疏水性羟基类或羧基类小分子抗肿瘤药物经酯化反应与炔基或巯基基团连接；然后经点击反应与功能化肝素类多糖偶联；最后通过点击反应与靶向配体共价结合，即可制得纳米前药复合物；具体步骤如下：

S1、将亲水性肝素类多糖溶于有机溶剂A中，在0℃条件下采用羧基活化剂进行活化0.5-2h，再加入含叠氮基的连接臂反应12-72h，反应结束后加入有机溶剂B沉淀产物，所得沉淀用水复溶、离心、上清置于透析袋中透析或置于超滤管中超滤，干燥后得叠氮化修饰的肝素类多糖；其中透析1-3d，超滤0.5-5h；

S2、取S1中叠氮化修饰的肝素类多糖溶于有机溶剂A中，在0℃条件下采用羧基活化剂进行活化0.5-2h，再加入含马来酰亚胺基团的连接臂反应12-72h，反应结束后加入有机溶剂B沉淀产物，所得沉淀用水复溶、离心、上清置于透析袋中透析或置于超滤管中超滤，干燥后得叠氮化、马来酰亚胺化修饰的肝素类多糖；其中透析1-3d，超滤0.5-5h；

S3、将含羧基的疏水性药物溶于有机溶剂C，冷却至0℃，加入氯化亚砜，反应完全后经减压蒸馏，再溶于有机溶剂C，冷却至0℃，加入对羟基苯甲醇，反应完全后经柱层析分离纯化得到经羟基修饰的疏水性药物；

S4、将草酰氯溶于有机溶剂C，冷却至0℃，加入含炔基的连接臂，反应完全后经减压蒸馏纯化得到中间体I；

S5、将中间体I分别溶于两份有机溶剂C，冷却至0℃，分别加入含羟基或经羟基修饰的疏水性药物，反应完全后分别经柱层析分离纯化得到中间体IIa或IIb；

S6、将叠氮化、马来酰亚胺化修饰的肝素类多糖溶于溶剂中，加入末端含巯基的靶向配体、惰性气体保护下反应12-72h，反应结束后向体系中加入冷的有机溶剂B沉淀产物，所得沉淀用水复溶、离心、上清置于透析袋中透析或置于超滤管中超滤，干燥后得具有靶向性的叠氮化修饰的肝素类多糖；其中透析1-3d，超滤0.5-5h；

S7、将具有靶向性的叠氮化修饰的肝素类多糖溶于溶剂中，加入摩尔比为1:0-20的中间体IIa和IIb、惰性气体保护下，加入碘化亚铜或五水硫酸铜及还原剂反应12-72h；反应结束后向体系中加入冷的有机溶剂B沉淀产物，所得沉淀用水复溶、离心、上清置于透析袋中透析或置于超滤管中超滤，干燥后得基于点击反应的ROS响应型肝素类多糖纳米前药复合物；其中透析1-3d，超滤0.5-5h。

2.根据权利要求1所述的基于点击反应的ROS响应型肝素类多糖纳米前药复合物，其特征在于，所述肝素类多糖包括未分级肝素、低分子量肝素及脱硫酸化肝素；所述疏水性抗肿瘤药物a或b包括肿瘤糖代谢抑制药物、MAPK通路抑制药物、肿瘤脂质代谢干扰药物、抗血管生成药物、破坏DNA结构和功能药物、影响核酸生成药物、作用于核酸转录药物、作用于DNA复制的拓扑异构酶Ⅰ抑制剂、作用于有丝分裂M期干扰微管蛋白合成的药物；其中，抗肿瘤糖代谢药物包括氯尼达明、双氯芬酸、3-溴丙酮酸、紫草素、脱氢表雄酮；MAPK通路抑制药物包括维罗非尼、司美替尼、安卓奎诺尔、东莨菪内酯；肿瘤脂质代谢干扰药物包括阿司匹林、吲哚美辛、萘普生、布洛芬和美洛昔康；抗血管生成药物包括瑞戈非尼、阿帕替尼、索拉非尼和舒尼替尼；破坏DNA结构和功能药物包括环磷酰胺、苯丁酸氮芥、顺铂和卡铂；影响核酸生成药物包括5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤和6-巯嘌呤；作用于核酸转录药物包括阿霉素、表阿霉素和吡柔比星；作用于DNA复制的拓扑异构酶Ⅰ抑制剂包括羟基喜树碱、伊立替康和拓扑替康；作用于有丝分裂M期干扰微管蛋白合成的药物包括长春新碱、紫杉醇和多西紫杉醇；羧酸类小分子抗肿瘤药物包括藤黄酸、新藤黄酸、熊果酸、苯达莫斯汀、甲氨喋呤及苯丁酸氮芥；所述靶向配体包括Plectin-1靶向肽、RGD多肽、F3肽和叶酸。