[发明专利]一种具有抗病毒活性的工程化免疫细胞及其构建方法和应用

说明书

本发明提供一种具有抗病毒活性的工程化免疫细胞及其构建方法和应用。所述工程化免疫细胞提高基因编辑方法重编程得到，是一种同时表达NK细胞标志物和T细胞标志物的ITNK细胞，其具有较好的抗病毒活性，能够分泌IFNγ，实现对病毒包括冠状病毒在内的抑制和杀伤效果；同时，所述工程化免疫细胞能够在体外大量繁殖，解决了NK细胞在体外难以扩增的问题。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种具有抗病毒活性的工程化免疫细胞及其构建方法和应用。

背景技术

细胞重编程(cell reprogramming)指的是分化的细胞在特定的条件下被逆转后恢复到全能性状态，或者形成胚胎干细胞系，或者进一步发育成一个新的个体的过程。在疾病的免疫治疗领域，已有通过细胞重编程来实现免疫细胞的类型转化的相关报道。例如，格拉斯通研究所(Gladstone Institutes)曾报道，通过特定的重编程方法，将促炎的效应T细胞重编程为抗炎的调节性T细胞；这种重编程对于自身免疫性疾病的治疗意义重大，具体地，在自身免疫性疾病中，被过度激发的效应T细胞会对机体造成损害，将这些细胞转化为调节性T细胞有助于减少免疫系统的过度活跃，使其恢复平衡，从而根本上治疗疾病。

目前，尚未见细胞重编程在人类感染疾病治疗中的应用。

冠状病毒(COV)是迄今为止已知的一类具有广泛自然宿主的RNA病毒，其中，新型冠状病毒(SARS-CoV-2)对公众健康构成了威胁。在许多病毒感染患者体内淋巴细胞，特别是自然杀伤细胞(NK细胞)水平下降。而NK细胞是天然免疫系统的重要组成部分，通过NKp46等NCR受体识别病毒及被病毒感染的细胞，参与多种病毒的免疫应答反应。NK细胞占外周血淋巴细胞约10～15％，是在天然免疫响应中起关键作用的淋巴样细胞。

与T细胞不同的是，NK细胞以MHC非限制性方式识别其靶标。NK细胞可呈现抗病毒作用和抗癌作用。尽管NK细胞具有作为对抗感染性疾病或癌症的治疗剂的潜力，但是正常人体内大多的NK细胞以休眠状态存在，且NK细胞在体外难以大量培养很难应用于抗病毒治疗。因此，在体外获得足够数量的自然杀伤细胞十分重要。

因此，提供一种能够在体外大量扩增且具有抗病毒作用的工程化免疫细胞对人类感染疾病治疗具有重要的意义。

发明内容

鉴于现有技术中存在的问题，本发明提供一种具有抗病毒活性的工程化免疫细胞及其构建方法和应用。利用细胞重编程方法构建出具有抗病毒活性的工程化免疫细胞，所得工程免疫细胞兼具T细胞和NK细胞的功能，同时还可以在体外大量扩增。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，一种具有抗病毒活性的工程化免疫细胞，其特征在于，所述工程化免疫细胞为同时表达NK细胞标志物和T细胞标志物的ITNK细胞。

本发明所述的工程化免疫细胞是能够同时表达NK细胞标志物和T细胞标志物的ITNK细胞，由T细胞重编程得到，所述T细胞可以从外周血和脐带血血液中分离，也可以由多能干细胞、造血干细胞定向诱导分化而来；所述工程化免疫细胞可以同时表达NK细胞和T细胞的抗原来识别和杀伤受体，说明其相比于NK细胞和T细胞具有更好的抗病毒能力；同时，所述工程化免疫细胞具有较好的体外扩增能力，可以解决了功能性NK细胞在体外难以扩增的难题。

其中，所述NK细胞标志物包括CD16、CD56、CD69、NKp46、NKp30或NKp44中的任意一种或至少两种的组合。优选地，所述T细胞标志物包括CD3。

第二方面，本发明提供一种工程免疫细胞的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：

(1)将gRNA与Cas9蛋白基因连接到载体上，所述gRNA的靶基因包括Bcl11b基因，得到CRISPR/CAS9基因敲除载体；