[发明专利]一种诺氟沙星的检测方法

权利要求书

1.一种诺氟沙星的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤a，将诺氟沙星单克隆抗体与生物素偶联，得免疫配基；每1mg诺氟沙星单克隆抗体与0.13-0.15mmol的生物素偶联；

步骤b，将所述免疫配基与羧基化纳米Fe₃O₄微球偶联，得免疫磁珠；所述羧基化纳米Fe₃O₄微球与诺氟沙星单克隆抗体的质量比为1:0.18-0.22；

步骤c，将链霉亲和素与羧基化水溶性发绿光上转化纳米粒子偶联，得荧光信号探针；所述链霉亲和素与羧基化水溶性发绿光上转化纳米粒子的质量比为1:4-7；

步骤d，将所述免疫磁珠加入待测样品中，加入磁场分离富集样品，再加入荧光信号探针，充分反应后，磁分离富集样品，得样品溶液；

步骤e，将所述样品溶液滴加至含有诺氟沙星人工抗原的免疫层析试纸条上，观察结果。

2.如权利要求1所述的诺氟沙星的检测方法，其特征在于，步骤b中，所述羧基化纳米Fe₃O₄微球的制备具体包括如下步骤：

步骤1，以氯化铁和氯化亚铁为原料，采用共沉淀法制备得到Fe₃O₄纳米粒子；

步骤2，将所述Fe₃O₄纳米粒子与油酸混合均匀，反应，分离，得油酸包覆的Fe₃O₄纳米粒子；

步骤3，向所述油酸包覆的Fe₃O₄纳米粒子中加入高锰酸钾溶液，反应，分离，得所述羧基化纳米Fe₃O₄微球。

3.如权利要求2所述的诺氟沙星的检测方法，其特征在于，步骤1中，所述氯化铁和氯化亚铁的摩尔比为1.7-2.0:1，反应温度为75-85℃，反应时间为2.5-3.5h；和/或

步骤2中，所述Fe₃O₄纳米粒子与油酸的摩尔比为1:0.8-1.2，反应温度为65-75℃，反应时间为50-70min；和/或

步骤3中，所述高锰酸钾溶液的浓度为8-12mg/mL，高锰酸钾与油酸的摩尔比为1:1.5-1.7，反应温度为20-30℃，反应时间为7-9h。

4.如权利要求1所述的诺氟沙星的检测方法，其特征在于：步骤c中，所述羧基化水溶性发绿光上转化纳米粒子的制备方法包括如下步骤：以乙酸钇、乙酸镱和乙酸铒为原料，通过热分解法制备疏水性上转化纳米粒子，然后通过配体交换法将其表面进行羧基化修饰，得到羧基化水溶性发绿光上转化纳米粒子。

5.如权利要求4所述的诺氟沙星的检测方法，其特征在于：所述乙酸钇、乙酸镱和乙酸铒的摩尔比为78-80:18-22:2。

6.如权利要求1所述的诺氟沙星的检测方法，其特征在于：所述免疫层析试纸条包括底板，底板上依次设有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，所述吸水垫和结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜上且位于所述底板上相对的两侧，所述样品垫交叠压在结合垫上；所述硝酸纤维素膜上设有包被有诺氟沙星人工抗原的检测线和包被有羊抗鼠多克隆抗体的质控线。

7.如权利要求6所述的诺氟沙星的检测方法，其特征在于：所述诺氟沙星人工抗原的包被量为0.05-0.1μg/条，所述羊抗鼠多克隆抗体的包被量为0.1-0.3μg/条。