[发明专利]一种诺氟沙星的检测方法

说明书

本发明涉及荧光免疫检测技术领域，具体公开一种诺氟沙星的检测方法。包括以下步骤：将诺氟沙星单克隆抗体与生物素偶联，得免疫配基；将所述免疫配基与羧基化纳米Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;微球偶联，得免疫磁珠；将链霉亲和素与羧基化水溶性发绿光上转化纳米粒子偶联，得荧光信号探针；将所述免疫磁珠加入待测样品中，加入磁场分离富集样品，再加入荧光信号探针，充分反应后磁分离富集样品，得样品溶液；将所述样品溶液滴加至含有诺氟沙星人工抗原的免疫层析试纸条上，观察结果。本发明提供的方法实现了快速分离目标物、双重信号放大提高检测灵敏度和增加检测系统稳定性的目的，能够实现对大量未知样品的简单快速筛选，检测成本低，有利于在实践中推广应用。

技术领域

本发明涉及荧光免疫检测技术领域，尤其涉及一种诺氟沙星的检测方法。

背景技术

诺氟沙星(Norfloxacin，NOR)是一种新型的第三代氟喹诺酮类光谱抗菌药物，具有抗菌谱广、抗菌活性强的特点，是治疗各种感染性疾病的重要合成药物，在临床上得到广泛地应用。近年来，由于诺氟沙星兽药的乱用和滥用，导致在动物源性食品中出现诺氟沙星兽药残留，对消费者带来了较大的健康风险，如导致过敏反应、癌变反应以及细菌耐药性增强等。因此，对诺氟沙星检测方法的研究迫在眉睫。

目前，有很多方法已经被报道用于检测水产品中的诺氟沙星，包括微生物法、薄层色谱法、分光光度法、气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等。虽然上述这些方法都能够用于诺氟沙星的检测，但是，检测前需要繁琐的样品前处理方法，还需要特定的检测仪器和专业检测人员操作，检测费用昂贵，检测时间长，不适合进行现场快速检测。因此，发展一种灵敏度高、检测快速、操作简便的诺氟沙星检测方法具有十分重要的意义。

免疫分析技术(immunoassay，IA)是一种基于抗原(或抗体)作为选择性化学试剂，特异性测定分析抗体(或抗原)的技术，能够克服上述微生物法、薄层色谱法以及仪器分析法等方法的缺陷，具有操作简单、专一性强和灵敏度高等优点。其中，免疫层析试纸条是二十世纪八九十年代在酶联免疫分析方法的基础上发展的新型快速免疫检测技术，因其具有操作简单快速、结果容易判断、安全无污染等诸多优点使其在世界各国得到广泛应用，成为体外快速诊断领域发展的趋势性方法。然而，该方法以胶体金作为信号标记物，对于实际样品检测需要相对复杂的前处理步骤(需多次重复离心、洗涤步骤)以消除基质对标记物(胶体金等)的影响，从而消除假阳性结果，因而限制了检测方法灵敏度的进一步提高。

发明内容

针对现有检测诺氟沙星的胶体金免疫层析试纸存在的需要繁琐的前处理，以及检测灵敏度有待进一步提高的问题，本发明提供一种诺氟沙星的检测方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种诺氟沙星的检测方法，包括以下步骤：

步骤a，将诺氟沙星单克隆抗体与生物素偶联，得免疫配基；

步骤b，将所述免疫配基与羧基化纳米Fe₃O₄微球偶联，得免疫磁珠；

步骤c，将链霉亲和素与羧基化水溶性发绿光上转化纳米粒子偶联，得荧光信号探针；

步骤d，将所述免疫磁珠加入待测样品中，加入磁场分离富集样品，再加入荧光信号探针，充分反应后，磁分离富集样品，得样品溶液；

步骤e，将所述样品溶液滴加至含有诺氟沙星人工抗原的免疫层析试纸条上，观察结果。