[发明专利]一种靶向CD47的高亲和力SIRPα突变体及其融合蛋白

说明书

本发明公开了一种靶向CD47的高亲和力SIRPα突变体及其融合蛋白，经实验证实，相比野生型SIRPα、TTI‑621，本发明的融合蛋白与CD47结合能力更强，从而更有效地抑制野生型SIRPα与CD47之间的相互作用，进而增强巨噬细胞的吞噬能力，且不引起凝血反应。本发明还公开了上述SIRPα突变体和融合蛋白在检测CD47试剂盒以及肿瘤治疗药物中的应用。本发明的融合蛋白具有优异的抑瘤效果，在肿瘤治疗药物的应用上极具开发前景。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗和分子免疫学领域，涉及一种高亲和力SIRPα突变体及其与人IgG1-Fc形成的融合蛋白。所述融合蛋白可以特异性识别CD47分子，阻断CD47与SIRPα相互作用，不引起凝血反应，且可抑制肿瘤细胞生长和/或增殖。

背景技术

CD47是一种广泛表达的高度糖基化跨膜蛋白，也被称为整合素相关蛋白(Integrin Associated Protein，IAP)，表达于细胞表面，属于免疫球蛋白超家族成员(Immunoglobulin Superfamily，IgSF)，在19世纪80年代首次被确认为人类卵巢癌的肿瘤抗原，继而CD47被发现在多种人类肿瘤中表达，包括急性骨髓白血病(AML)、慢性骨髓白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍金性淋巴瘤(NHL)、多发性骨髓瘤(MM)、膀胱癌和其他实体瘤，迄今为止，人们已证实CD47在几乎所有的肿瘤细胞上高表达，并在肿瘤的生长、转移和复发中扮演着重要的角色。

CD47分子与其配体分子信号调节蛋白α(Signal regulatory proteinα,SIRPα)、血小板反应蛋白(thrombospondin-1，TSP1)以及整合素(integrins)相互作用，介导细胞凋亡、增殖、免疫等一系列反应。SIRPα是一种细胞表面糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族，其胞外段包含3个免疫球蛋白样结构域，最远端为1个IgV结构域，近膜端为2个IgC结构域；胞内包含2个免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，ITIM)。SIRPα特异性地表达于神经细胞表面以及髓系造血细胞表面如巨噬细胞、树突状细胞(DCs)，以单体形式存在。巨噬细胞表面的SIRPα与CD47相互结合，进而导致SIRPα的胞质内侧免疫受体酪氨酸抑制性基序ITIMs被磷酸化，并可结合含有SH2结构域的酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2，两者均可抑制肌球蛋白IIA在吞噬细胞突触中的集聚，进而传递“别吃我”的抑制信号，抑制巨噬细胞的吞噬作用，减少肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor，TNF)分泌等。研究表明，大多数肿瘤细胞也通过高表达CD47分子来逃避天然免疫系统监视和杀伤。因此，阻断肿瘤细胞与巨噬细胞之间CD47/SIRPα相互作用可以增强巨噬细胞吞噬肿瘤能力，进而抑制并杀伤肿瘤。

越来越多数据表明，抗体或Fc融合蛋白能阻断CD47-SIRPα信号通路，激活巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。因此，靶向这一信号通路的抗体类药物有望成为肿瘤治疗潜在的药物。目前，靶向CD47的临床在研抗体类药物按结构主要分为3类，即单克隆抗体(如临床在研药物Hu5F9)、SIRPα-Fc融合蛋白(如临床在研药物TTI-621、ALX148)和双特异性抗体。然而，一方面天然SIRPα-Fc融合蛋白与CD47蛋白的亲和力不高，不能有效地发挥抗肿瘤活性；另一方面，现有靶向CD47的抗体类药物会产生溶血性贫血或者血小板减少等血液学相关副作用，亟需开发出亲和力强、安全性高的新型疗法。

基于现有技术存在的技术问题，本发明的目的就是提供一种对CD47具有高度识别并特异结合能力的蛋白质，以及能充分发挥免疫调节活性的融合蛋白。

发明内容