[发明专利]一种白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法

权利要求书

1.一种白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、预冻

将白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白半成品原液，按照0.5mL/cm²平铺于冻干不锈钢盘中，将所述冻干不锈钢盘置于真空冷冻干隔板上，预冻条件为：冷阱温度≤-80℃，气压为一个大气压，用时30～40min升温至-55℃～-45℃，并维持230～260min；

S2、升华干燥

S2.1、一阶升华

所述冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，一阶升华条件为：冷阱温度≤-80℃，真空度8pa，用时60min升温至-30℃，并维持300min；

S2.2、二阶升华

所述冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，二阶升华条件为：冷阱温度≤-80℃，真空度8pa，用时30min升温至-25℃，并维持1500min；

S3、解析干燥

所述冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，解析干燥条件为：冷阱温度≤ -80℃，真空度0pa，用时60～90min升温至26～30℃，并维持400～600min，制得CRM197蛋白冻干粉；

所述白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白半成品原液包括以下原料组分：CRM197蛋白溶液、蔗糖、氢氧化钠、盐酸、注射用水；

所述白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白半成品原液的配制方法为：量取一定量 CRM197蛋白溶液，按照测定的蛋白浓度，计算出蛋白总量M；按照9M的重量称量蔗糖，溶解于CRM197蛋白溶液中，使用注射用水稀释至蛋白浓度为2～10mg/mL；使用氢氧化钠或盐酸，调节最终pH为6.5～7.5，即为冻干半成品原液。

2.根据权利要求1所述的白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法，其特征在于，预冻条件为：冷阱温度≤-80℃，气压为一个大气压，用时30min升温至-45℃，并维持240min。

3.根据权利要求1所述的白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法 ，其特征在于：解析干燥条件为：冷阱温度≤-80℃，真空度0pa，用时60min升温至26℃，并维持600min。

4.根据权利要求1所述的白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法 ，其特征在于：使用注射用水稀释至蛋白浓度为5～8mg/mL。

5.根据权利要求1所述的白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法 ，其特征在于：使用注射用水稀释至蛋白浓度为6mg/mL。

6.根据权利要求1所述的白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法 ，其特征在于：使用氢氧化钠或盐酸，调节最终pH为7.0。