[发明专利]一种基于核酸适配体的荧光传感器检测抗生素的方法

权利要求书

1.一种基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，其特征在于，将适配体与互补链结合，然后加入抗生素，抗生素和适配体互补链竞争性地与适配体结合，部分互补链被释放，随后加入核酸外切酶I，加入与DNA双链结合的荧光染料，利用加入抗生素前后体系荧光信号的变化，实现对目标物的定量检测。

2.根据权利要求1所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)构建荧光适配体传感器：将配好的浓度相同的适配体溶液与互补链溶液混合，加入含有缓冲液和抗菌水的离心管中，振荡均匀；

(2)将步骤(1)中的离心管置于85-95℃振荡仪中振荡5-10min，取下自然冷却后离心并混匀；

(3)加入不同体积或不同浓度的的抗生素溶液，在室温下避光振荡；

(4)加入核酸外切酶I，在室温下避光振荡；

(5)加入荧光染料，在室温下避光振荡10min-20min；

(6)转移至酶标板中，测每个样品的荧光强度。

3.根据权利要求1所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，其特征在于，所述适配体的序列为：

5’-GAG GGC AAC GAG TGT TTA TAG A -3’；

所述互补链的序列为：

C:5′-TCT ATA AAC ACT CGT TGC CCT C-3′

A1:5′-TCT ATA AAC ACT CGT TGC CCT C-3′

A2:5′-TCT ATA AAC ACT TGT TGC CCT C-3′

A3:5′-TCT ATA AAC ACT TTT TGC CCT C-3′

A4:5′-TCT ATA AAC ATA TGT TGC CCT C-3’

A5:5’-TCT ATA AAC ACA TAT TGC CCT C-3’

A6:5’-TCT ATA AAC TTA TGT TGC CCT C-3’

B1:5′-TCT ATA AAC ACT-3′

B2:5′-TCT ATA AAC ACT CG-3′

B3:5′-TCT ATA AAC ACT CGT T-3′

4.根据权利要求2所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，其特征在于，步骤(1)中，适配体及其互补链的总体积范围在10μL～20μL。

5.根据权利要求2所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，其特征在于，步骤(1)中，缓冲液为2×TBSM缓冲液，体积范围在0.5μL～10μL，pH范围在7.0～8.0；抗菌水的体积在40μL～100μL。

6.根据权利要求2所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，其特征在于，步骤(3)中，加入的抗生素为磺胺类。

7.根据权利要求2所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，其特征在于，步骤(3)中，加入不同体积的抗生素溶液，体积梯度的设置范围为0～100μL，在室温下避光振荡1h～2h。

8.根据权利要求2所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，其特征在于，步骤(5)中加入荧光染料的体积为2μL～10μL。

9.根据权利要求2所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，其特征在于，步骤(6)中，荧光检测条件为：测定体系在522-602nm处的荧光强度，激发波长为460-500nm。