[发明专利]一种基于核酸适配体的荧光传感器检测抗生素的方法

说明书

本发明公开了一种基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，该方法选择可以与抗生素特异性结合的DNA单链作为适配体，并设计多条与适配体配对强度各异的互补链，利用荧光染料与双链DNA的特性结合进行检测。当加入抗生素时，抗生素和适配体互补链竞争与适配体结合，互补链被释放，被随后加入的核酸外切酶I(Exonuclease I)全部剪切。接着，利用双链特异性荧光染料对DNA浓度进行报告检测，得到抗生素浓度与荧光强度的关系并定量分析。本方法优点在于操作简便，所需样品量少，灵敏度高，且具有良好的实用价值，有望应用于医疗、环境、畜牧养殖业中抗生素的检测。

技术领域

本发明涉及生物传感器检测方法，具体为一种基于核酸适配体的荧光传感器检测抗生素的方法。

背景技术

抗生素的生产和使用广泛，据统计仅在中国每年就有约6000吨抗生素用于饲料添加剂，75％的抗生素不被动物机体吸收而随动物粪便排出，导致畜禽养殖废水成为自然界水体环境中抗生素污染的主要来源。抗生素残留对人体健康有着十分严重的危害，包括致癌、致畸、致突变作用、人体对此类药物的长期暴露，通常不会造成急性中毒，而主要是引起慢性中毒。抗生素污染已被视为一类新型的重要的水体污染物而成为国际研究的前沿课题。

磺胺类药物为人工合成的抗菌药，用于临床已近50年，它具有抗菌谱较广、性质稳定、使用简便、生产时不耗用粮食等优点。磺胺间二甲氧嘧啶，常温下为一种白色或类白色结晶或结晶形粉末，几乎无味。不溶于水、氯仿，微溶于乙醇，可溶于丙酮，易溶于稀无机酸和强碱溶液。遇光易变质，色渐变深。磺胺间二甲氧嘧啶是一种长效磺胺原药，其抗菌谱与磺胺嘧啶相似，但抗菌作用较强，适用于菌痢、肠炎、扁桃体炎、泌尿道感染、蜂窝织炎、皮肤化脓感染等疾病，吸入粉尘，皮肤接触和不慎吞咽有害。对眼睛、呼吸道和皮肤有刺激作用。长期服用容易损伤肾功能及神经系统，磺胺药中毒。

现有的抗生素分析检测方法繁琐，依赖HPLC、LC-MS等大型仪器，检测所需时间且灵敏度有待进一步提升，所需样品中抗生素的含量达到一定程度才能检测出，所以需要进一步探索性能更好分析方法。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于提供一种基于核酸适配体的荧光传感器检测抗生素的方法，该方法操作简便，所需样品量少，灵敏度高。

技术方案：本发明所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，将适配体与互补链结合，然后加入抗生素，抗生素和适配体互补链竞争性地与适配体结合，部分互补链被释放，随后加入核酸外切酶I，加入与DNA双链结合的荧光染料，利用加入抗生素前后体系荧光信号的变化，实现对目标物的定量检测。

所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，具体包括如下步骤：

(1)构建荧光适配体传感器：将配好的浓度相同的适配体溶液与互补链溶液混合，加入含有缓冲液和抗菌水的离心管中，振荡均匀；

(2)将步骤(1)中的离心管置于85-95℃振荡仪中振荡5-10min，取下自然冷却后离心并混匀；

(3)加入不同体积或不同浓度的的抗生素溶液，在室温下避光振荡；

(4)加入核酸外切酶I，在室温下避光振荡；

(5)加入荧光染料，在室温下避光振荡10min-20min；

(6)转移至酶标板中，测每个样品的荧光强度。

所述的基于核酸适配体荧光传感器检测抗生素的方法，所述适配体的序列为：

5’-GAG GGC AAC GAG TGT TTA TAG A-3’；

所述互补链的序列为：

C:5′-TCT ATA AAC ACT CGT TGC CCT C-3′