[发明专利]一种提取食用菌高质量DNA原始样品的筛选方法

说明书

一种提取食用菌高质量DNA原始样品的筛选方法，包括以下步骤：（1）选取食用菌的菌丝体样品与子实体样品，分别进行总糖与多糖含量的检测，并进行含量的对比，选择多糖含量最低的样品为初选样品；（2）筛选得到的初选样品如果是子实体样品，则对不同生长阶段的子实体进行取样，选择多糖含量最低的样品为第二次筛选样品；（3）对该生长阶段的子实体的不同部位进行取样，选择多糖含量最低的样品为第三次筛选样品；（4）检验第三次筛选样品。通过本发明筛选的原始样本提取DNA，采用ITS法跑条带，其条带清晰度好，没有明显的拖尾等现象，减少后续数据统计的误差，可以大幅提高基因测定、遗传关系远近聚类分析、菌种鉴定和蛋白组学分析的工作效率。

技术领域

本发明涉及食用菌DNA提取技术，具体涉及一种提取食用菌高质量DNA原始样品的筛选方法。

背景技术

随着食用菌产业的快速发展，人们对食用菌品种之间的亲缘关系的分析，菌株的分子鉴定，菌种的基因测序和菌种的蛋白组基因测序等都离不开高质量高纯度的DNA的提取；用于食用菌DNA提取的样品有三种：第一种是培养皿PDA培养的菌丝体，第二种是用液体培养基培养的菌丝球，第三种是子实体。第一种菌丝体因培养和取样都不方便，一般使用极少；经常使用的样品是菌丝球和子实体。

对食用菌DNA提取的最大干扰是食用菌里面的多糖，多糖越多，对高纯度高质量的DNA提取的干扰因素就越大，进而影响基因测序和品种鉴定及聚类分析的精准度；不同的食用菌品种一般都有不同含量的多糖，而且在各个生长阶段的同一种食用菌样品的多糖含量都有显著差异；一般的优化提取方法是最大限度的去除提取DNA过程中的多糖，但是去除多糖的过程中会破坏掉DNA结构的完整性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种可从源头上减少多糖对后续提取DNA的干扰的提取食用菌高质量DNA原始样品的筛选方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种提取食用菌高质量DNA原始样品的筛选方法，包括以下步骤： （1）筛选初选样品：选取食用菌的菌丝体样品与子实体样品，分别进行总糖与多糖含量的检测，并进行含量的对比，选择多糖含量最低的样品为初选样品； （2）筛选第二次筛选样品：步骤（1）筛选得到的初选样品如果是菌丝体样品，直接用于DNA提取；筛选得到的初选样品如果是子实体样品，则对不同生长阶段的子实体进行取样，分别进行总糖与多糖含量的检测，并进行含量的对比，选择多糖含量最低的样品为第二次筛选样品； （3）筛选第三次筛选样品：根据步骤（2）筛选得到的第二次筛选样品所属的生长阶段，对该生长阶段的子实体的不同部位进行取样，分别进行总糖与多糖含量的检测，并进行含量的对比，选择多糖含量最低的样品作为第三次筛选样品； （4）检验第三次筛选样品：对第三次筛选样品进行DNA提取，并进行ITS鉴定，查看DNA条带的清晰度和完整度，是否得出准确的遗传序列，以及是否达到预期效果。

进一步，所述总糖与多糖含量的检测包括还原糖提取及含量测定、总糖含量测定和多糖含量的计算。

进一步，所述还原糖提取及含量测定包括：称取食用菌相应的样品，洗净切碎后磨成浆液，然后将浆液压滤，得到滤渣；将滤渣烘干后研细，然后过筛得到筛下物为待测样品；将待测样品置于烘箱中烘干至恒重，然后依次进行粉碎和过筛；将得到的粉末包于滤纸包内，浸于烧杯中用沸水浸煮，然后多次提取获得提取液，再混合多次提取的提取液并浓缩得到浓缩液，往浓缩液中添加无水乙醇，并搅拌均匀，静置一段时间后，离心并取上清液，之后用蒽酮硫酸比色法检测上清液的还原糖含量。

进一步，所述总糖含量测定包括：用蒽酮硫酸比色法检测还原糖提取过程的所述提取液的总糖含量；所述多糖含量的计算为：总糖含量减去还原糖含量即为多糖含量。