[发明专利]检测冠状病毒的组合物、试剂盒和方法

说明书

本发明提出了一种检测冠状病毒的组合物，该组合物包括Seq ID:1和Seq ID:2所示序列和/或Seq ID:3和Seq ID:4所示序列，其中，该组合物还可以包含Seq ID:5和Seq ID:6所示序列。利用本发明提供的组合物可以对新冠状病毒的ORF1ab基因和/或N基因进行有效扩增和荧光定量PCR检测，检测步骤简单、降低了污染风险，能够快速、高效、准确的检出目的基因。本发明还提供了检测冠状病毒的试剂盒及用于非诊断目的的检测冠状病毒的方法，该方法具有良好的稳定性、灵敏度及特异性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及检测冠状病毒的组合物、试剂盒和用于非诊断目的的检测冠状病毒的方法。

背景技术

冠状病毒为不分节段的单股正链RNA病毒，属于巢病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)正冠状病毒亚科(Orthocoronavirinae)，根据血清型和基因组特点冠状病毒亚科被分为α、β、γ和δ四个属，可以感染许多动物物种，包括人、蝙蝠、狗、猪、老鼠、鸟、牛、鲸、马、山羊、猴子等。已知感染人的冠状病毒有6种，包括α属的229E和NL63，β属的OC43和HKU1、中东呼吸综合征相关冠状病毒(MERSr-CoV)和严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(SARSr-CoV)。2019爆发的新型冠状病毒属于β属的新型冠状病毒。

新型冠状病毒引起的新冠肺炎常见体征有发热、咳嗽、气促和呼吸困难等呼吸道症状。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，进一步导致死亡。目前对于2019新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法，但许多症状可以对症进行辅助护理和支持性治疗。

针对该病毒导致的临床疾病，迫切需要开发灵敏、快速、特异、稳定和便于使用的诊断方法，第一时间提供准确、特异性的快速检测探针引物，对于该疾病的防控极为重要，在临床应用中能够为明确病原、早期诊断提供依据，促进早期合理治疗，减少经验性抗生素使用增加的耐药负担，及时控制病情。荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。随着PCR反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模板的量。当在荧光定量PCR检测系统中引入内参基因，其同时与目的基因检测，计算出一个待测样本中目标核酸序列与校正样本中同一序列表达的相对变化。

研发一种能够快速准确检测新型冠状病毒且简单的方法具有重要意义。此外，仍然需要设计性能更优的引物和探针，以快速、特异、灵敏、精确检测新型冠状病毒。

发明内容

在本发明中，我们成功设计了针对新型冠状病毒的两个基因的引物和探针，利用该引物和探针能够特异性扩增新型冠状病毒SARS-CoV-2样本，具有较好的稳定性、灵敏度和特异度。

本发明第一方面提供了一种检测冠状病毒的组合物，组合物包括Seq ID:1和SeqID:2所示序列组成的第一对引物。利用此引物对可有效扩增新冠状病毒的ORF1ab基因，从而判断是否存在冠状病毒是否存在及是否存在ORF1ab基因片段。

本发明第二方面提供了一种试剂盒，该试剂盒包含Seq ID:1和Seq ID:2所示序列组成的第一对引物，和/或Seq ID:3和Seq ID:4所示序列组成的第二对引物，和/或Seq ID:5所示序列的探针，和/或Seq ID:5、Seq ID:6所示序列的两种探针，其中所述两种探针标记不同的荧光报告基团。

由此，根据本发明的实施例，本发明第二方面提供的试剂盒可分别用于扩增ORF1ab基因和/或N基因，荧光定量PCR检测ORF1ab基因和/或N基因，该试剂盒进行荧光定量PCR进行检测时，具有较好的灵敏度和特异度。

本发明第三方面提供了一种用于非诊断目的的检测冠状病毒的方法，该方法包括以下步骤：