[发明专利]一种鉴别结核杆菌感染与非结核分枝杆菌感染的方法、系统及应用

说明书

本发明涉及鉴定结核杆菌感染与非结核分枝杆菌(NTM)感染的方法及系统。本发明提出一种重组结核杆菌Esat‑6蛋白和CFP‑10蛋白组成的变态反应原和NTM菌体蛋白同体双臂皮肤试验，向待测生物注射重组结核杆菌Esat‑6蛋白和CFP‑10蛋白组成的变态反应原以及NTM菌体蛋白进行皮试反应；根据皮试反应的结果判断所述待测生物的结核杆菌和NTM感染情况。本发明提供的检测结核杆菌感染和非结核分枝杆菌感染的系统既可以联合使用应用于鉴别诊断，也可分别单独用于结核杆菌感染或NTM感染检测。本发明检测结果准确，可重复性高，为不容易找到病原学诊断依据的疾病诊断提供新思路。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种鉴别结核杆菌感染与非结核分枝杆菌感染的方法、系统及应用。

背景技术

非结核分枝杆菌(NTM)引起的NTM病呈快速增多趋势，NTM是指除结核分枝杆菌复合体、麻风分枝杆菌外的分枝杆菌。NTM感染引起的NTM病主要以侵犯人体肺脏引发肺部病变(NTM肺病)，还可感染淋巴结、骨骼、关节、皮肤和软组织等组织器官。

NTM主要存在水源和土壤，因此人群对NTM的暴露和感染普遍存在。目前报道已分离的NTM约190多种，其中大都是条件致病菌；Runyon分类法将NTM分为光产色菌、暗产色菌、慢生长菌和快生长菌四群。菌阴肺结核患者可通过肺部影像学、免疫学和临床进行综合诊断，但是NTM肺病影像学与肺结核非常相似，通过影像学无法鉴别诊断肺结核和NTM肺病。肺结核病细胞免疫学诊断方法有皮试试验(TST)和干扰素释放试验(IGRA)，均采用结核分枝杆菌特异的且大部分NTM菌和卡介苗均缺失的蛋白进行结核分枝杆菌感染诊断。由于目前国内无NTM病免疫学诊断的方法，无法判定菌阴肺结核病患者是否存在NTM合并感染，也无法诊断菌阴的NTM病。NTM对不同抗结核药有不同程度的天然耐药性，因此，菌阴肺结核与NTM肺部治疗方案是不同的。只有依据菌阴肺结核与NTM肺病鉴别诊断，才能对患者采取合理、科学的治疗方案，降低治疗成本和提高治疗效果。

现有的NTM病诊断方法包括临床症状、影像学和微生物学检查。NTM肺病临床症状和影像学均与肺结核相似。NTM病原体检测常用方法有NTM分离培养后根据其培养特性、生化反应和分子生物学检测进行鉴定，这些方法均基于为针对病原体的“有菌”诊断。现有针对NTM菌的诊断方法在临床应用中存在许多问题，首先，涂片抗酸染色镜检敏感度低、无法区分结核杆菌与NTM。其次，NTM肺病诊断标准是至少2次独立的痰标本培养阳性、或1次支气管灌洗液培养阳性。支气管灌洗液培养可代替痰培养，解决了无痰或少痰患者NTM培养的问题，但培养周期长(固体3周、液体10天以上)。最后，NTM分子诊断直接检测临床标本敏感度低，NTM检测下限(1200CFU/ml)低于结核杆菌(16CFU/ml)。因此，现有方法均基于针对病原体的“有菌”诊断，缺少有效的针对病原学检测阴性的菌阴肺结核患者与NTM病的鉴别诊断方法。

非病原学诊断的方法主要为免疫学诊断，传统的结核杆菌与NTM感染鉴别实验采用同体双臂分别注射结核菌素(TB-PPD)与非结核杆菌纯蛋白衍生物如胞内分枝杆菌纯蛋白衍生物PPD-B皮试进行鉴别，依据皮试阳性值大小来评估结核杆菌感染或非结核杆菌感染，但由于TB-PPD含多种蛋白衍生物，与卡介苗、NTM存在抗原交叉，即使TB-PPD阳性也不能排除是卡介苗接种或NTM感染导致阳性，并且皮试阳性值的大小也不再可靠

发明内容

为了解决目前无NTM病免疫学诊断方法和无法鉴别诊断菌阴肺结核与NTM肺病诊技术中存在的瓶颈问题，本发明提供一种重组结核杆菌Esat-6蛋白和CFP-10蛋白组成的变态反应原和NTM菌体蛋白同体双臂皮肤试验，根据两种皮试试剂呈现的阳性或阴性反应，综合判断结核杆菌感染还是NTM感染，本发明为不容易找到特异抗原的疾病诊断提供新思路。

第一方面，本发明提供一种鉴别结核杆菌感染和非结核分枝杆菌感染的方法，包括：

向待测生物注射重组结核杆菌Esat-6蛋白和CFP-10蛋白组成的变态反应原以及NTM菌体蛋白进行皮试反应；