[发明专利]一种银杏叶黄酮提取物及其制备方法和特征图谱构建方法

权利要求书

1.一种银杏叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

1)将符合国家药典标准的银杏叶提取物用8％(v/v)乙醇溶液溶解，制成上样液；

2)将上样液通过30～60目聚酰胺柱，用4倍柱体积纯化水洗脱，流速2BV/h，弃去洗脱液，再用7倍柱体积0.15％(v/v)碳酸钠溶液洗脱，流速2BV/h，收集碳酸钠溶液洗脱液；

3)将碳酸钠溶液洗脱液调节pH至3，制成二次上样液；

4)将二次上样液通过30～60目聚酰胺柱，用4倍柱体积纯化水洗脱，流速4BV/h，弃去洗脱液，再用7倍柱体积60％(v/v)乙醇溶液洗脱，流速4BV/h，收集乙醇溶液洗脱液；

5)浓缩乙醇溶液洗脱液，干燥、粉碎，即得银杏叶黄酮提取物。

2.一种如权利要求1制备方法所获得的银杏叶黄酮提取物，其特征在于，该黄酮提取物总黄酮的含量不低于85％(w/w)，所述黄酮提取物药效成分由如下部分组成：杨梅素-3-O-芸香糖含量3％～6％(w/w)，杨梅素-3-O-葡萄糖3％～6％(w/w)，芦丁8％～11％(w/w)，万寿菊素-3-O-芸香糖5％～7％(w/w)，槲皮素-3-O-芸香糖5％～7％(w/w)，山柰酚-3-O-芸香糖6％～9％(w/w)，异鼠李素-3-O-芸香糖6％～10％(w/w)，槲皮苷-2”-(6”-对-桂皮酰基葡萄糖基)13％～15％(w/w)，山柰酚-3-(6”'-对-桂皮酰基葡萄糖基-鼠李糖苷)11％～15％(w/w)。

3.根据权利要求2所述的银杏叶黄酮提取物，其特征在于，所述槲皮苷-2”-(6”-对-桂皮酰基葡萄糖基)与芦丁的含量比为1.2～1.8，山柰酚-3-(6”'-对-桂皮酰基葡萄糖基-鼠李糖苷)与芦丁的含量比为1.0～1.8，槲皮素-3-O-芸香糖与山柰酚-3-O-芸香糖的含量比值为0.6～1.15。

4.根据权利要求2所述的银杏叶黄酮提取物，其特征在于，所述槲皮苷-2”-(6”-对-桂皮酰基葡萄糖基)与芦丁的含量比为1.33～1.64，山柰酚-3-(6”'-对-桂皮酰基葡萄糖基-鼠李糖苷)与芦丁的含量比为1.16～1.57，槲皮素-3-O-芸香糖与山柰酚-3-O-芸香糖的含量比值为0.75～0.91。

5.一种如权利要求2所述的银杏叶黄酮提取物的特征图谱构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)供试品的制备：取银杏叶黄酮提取物5～10mg，精密称定，置10mL量瓶中，加50％(v/v)甲醇溶解，并稀释至刻度，滤膜过滤，取续滤液，即得；

2)对照品的制备：取芦丁对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；

3)将供试品溶液进行超高效液相色谱分析，得到超高效液相色谱特征图谱，根据与对照品的相对保留时间确定共有峰，采用液质联用法指证特征峰的化学成分，利用标准品对照，建立银杏叶黄酮提取物的超高效液相色谱特征图谱；所述超高效液相色谱分析的条件为：

色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Phenomenx Luna Omega(2.1×100mm，1.6μm)色谱柱，理论板数按芦丁峰计应不低于2500；

质谱条件：采用Q-TOF方法，一级质谱参数为干燥气温度300～400℃，干燥气流速10～15L/min，雾化器压力42～46psig，毛细管压力4500～5500V；二级质谱参数为干燥气温度300～400℃，干燥气流速10～15L/min，雾化器压力40～50psig，毛细管压力4500～5500V，碰撞能量90～120V；

流动相为乙腈(A)与0.08～0.12％(v/v)甲酸水溶液(B)，检测波长300～370nm，柱温27～33℃；

梯度洗脱：按照体积分数计，如表1所示：

表1流动相洗脱梯度