[发明专利]一种银杏叶黄酮提取物及其制备方法和特征图谱构建方法

说明书

本发明提供一种银杏叶黄酮提取物及其制备方法和特征图谱构建方法，银杏叶黄酮提取物药效成分由如下部分组成：杨梅素‑3‑O‑芸香糖含量3％～6％(w/w)，杨梅素‑3‑O‑葡萄糖3％～6％(w/w)，芦丁8％～11％(w/w)，万寿菊素‑3‑O‑芸香糖5％～7％(w/w)，槲皮素‑3‑O‑芸香糖5％～7％(w/w)，山柰酚‑3‑O‑芸香糖6％～9％(w/w)，异鼠李素‑3‑O‑芸香糖6％～10％(w/w)，槲皮苷‑2”‑(6”‑对‑桂皮酰基葡萄糖基)13％～15％(w/w)，山柰酚‑3‑(6”'‑对‑桂皮酰基葡萄糖基‑鼠李糖苷)11％～15％(w/w)。该黄酮提取物由银杏叶提取物经聚酰胺柱两次分离得到，可作为食品、药品、保健品中的抗氧化剂。本发明解决了银杏叶黄酮提取物效应成分不明的问题，降低了质控难度，建立的超高效液相特征图谱对质量检测具有专属性。

技术领域

本发明涉及生物技术及医药技术领域，特别是一种银杏叶黄酮提取物及其制备方法和特征图谱构建方法。

背景技术

银杏叶提取物是广泛用于心脑血管疾病的天然植物药，主要成分为黄酮、内酯、有机酸等，其中黄酮为主要的活性物质与指标物质之一。银杏中黄酮结构少部分为苷元，其包括槲皮素、山柰酚、异鼠李素、杨梅素、木犀草素、芹菜素、丁香亭、二氢山柰酚等；大部分为上述苷元的3位或7位糖苷，糖基主要为D-葡萄糖、L-鼠李糖、芸香糖等单糖、二糖、三糖结构。此外，还含有桂皮酰基的黄酮糖苷如槲皮苷-2”-(6”-对-桂皮酰基葡萄糖基)(2”-(6”-p-coumaroylglucosyl)quercitrin)、山柰酚-3-(6”'-对-桂皮酰基葡萄糖基-鼠李糖苷)(Kaempferol 3-(6”'-p-coumarylglucosyl-rhamnoside))等，这类桂皮酰黄酮糖苷是银杏中特有的成分，被认为是银杏中的药效活性成分。US20070037756“Compositions andmethods for the prevention and treatment of circulatory conditions(预防和治疗循环系统疾病的组合物和方法)”中报道了槲皮苷-2”-(6”-对-桂皮酰基葡萄糖基)和山柰酚-3-(6”'-对-桂皮酰基葡萄糖基-鼠李糖苷)作为血小板聚集抑制剂用于预防和治疗某些心血管疾病。其中，槲皮苷-2”-(6”-对-桂皮酰基葡萄糖基)和山柰酚-3-(6”'-对-桂皮酰基葡萄糖基-鼠李糖苷)的化学结构式如下：

黄酮类物质因其酚羟基结构表现出重金属络合以及抗氧化作用；有报道表明银杏中槲皮素糖苷可以降低血压，其机理可能是在血管收缩过程中加快超氧化物或过氧化氢的消除；其他临床研究报道表明槲皮素相关苷可以增强血管功能、抗免疫、抗感染等功能；银杏中山柰酚相关黄酮苷通过PI3K/Akt/PKB信号通路的调控表现出抗凝血作用。可见，银杏叶黄酮类物质具有较多且显著的药理药效作用，提高银杏叶黄酮类物质的含量具有非常高的应用价值。

以符合国家药典标准的银杏叶提取物(总黄酮醇苷含量不得少于24％(w/w)，萜类内酯含量不得少于6％(w/w))为原料制备银杏叶黄酮的提取方法已有相关报道。其中，郑向伟等在“酸性-极性相结合的改性大孔树脂柱色谱制备高纯度银杏黄酮醇苷”、(中国医药工业杂志,2018,49(9):1283～1288)一文中利用极性-酸性相结合的改性大孔树脂(LSA-12S)柱，湿法装柱(径高比1∶5)，湿法上样(上样比例1∶30)，依次用水、0.1％(v/v)碳酸钠溶液(各5倍柱体积)洗脱，收集0.1％(v/v)碳酸钠溶液洗脱产物，减压浓缩至适当体积，用稀盐酸调至pH 1～3。将该酸性产物上样于聚酰胺柱(径高比1∶10，上样比例1∶30)，依次用水和20％(v/v)、80％(v/v)乙醇溶液(各5倍柱体积)，收集80％(v/v)乙醇洗脱部分，减压浓缩、干燥，得到纯度≥80％(w/w)的银杏黄酮醇苷产物；总黄酮醇苷含量为83.1±7.5％(w/w)，总黄酮醇苷转移率20.9±7.7％。文中未公开其所制备的银杏黄酮苷种类及对应含量。