[发明专利]抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4的多克隆抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4的多克隆抗体及其制备方法与应用，其包括如下步骤：构建含有鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因的重组表达载体；将所述重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞中诱导表达，获得鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原；将所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原进行动物免疫，获得抗血清，然后分离纯化获得抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4多克隆抗体。本发明可用于检测鱼类MRP在蛋白水平上的组织表达及对重金属铅和汞胁迫、有机氯类杀虫剂DDT和Lindane的特异性应答，由此可作为环境风险评估的分子标志物。

技术领域

本发明属于水产养殖领域，具体涉及一种鱼类多毒物耐受蛋白基因MRP4/ABbcc4及其编码蛋白与应用。

背景技术

多毒物耐受蛋白(Multi-toxicants Resistance Protein,MRP)属于ABC结合子转运蛋白(ATP binding cassette transporters)超家族的成员。作为一类跨膜蛋白，MRP能够识别多种结构不同的内源性物质，并负责参与II相解毒反应产物的转运(如还原型谷胱甘肽GSH、葡糖苷酸、硫酸酯和甘氨酸等的结合物)，被认为是III相解毒因子，在细胞对多种有毒物质的解毒和排泄中具有重要作用。

目前，在人类和其他哺乳动物中已报道9个MRP成员基因，且大多数都与多药耐药性(Multi-drug Resistance)相关。根据结构特征和系统进化关系，可以将MRP分为MRP1-MRP9。由于生活环境的差异，鱼类MRP可能进化出与哺乳动物同源基因不同的功能。另外，MRP转运蛋白在组织防御、毒物解毒或排泄和信号转导等方面具有重要功能，因此开展鱼类MRP研究将有助于水产分子育种、鱼类疾病防治和生态环境保护。但目前对于鱼类MRP的研究尚处于起步阶段，尤其是在鱼类MRP的组织表达、定位及对不同环境毒物胁迫的应答研究中尚未获取深入研究成果。

发明内容

本发明针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4的多克隆抗体及其制备方法与应用，其可用于检测鱼类MRP(即MRP4/Abcc4)在蛋白水平上的组织表达及对重金属铅和汞胁迫、有机氯类杀虫剂DDT和Lindane的特异性应答，由此可作为环境风险评估的分子标志物。

本实施新型为解决上述技术问题所提供的技术方案如下：

提供了一种抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4多克隆抗体的制备方法，其包括如下步骤：

构建含有鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因的重组表达载体；

将所述重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞中诱导表达，获得鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原；

将所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原进行动物免疫，获得抗血清，然后分离纯化获得抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4多克隆抗体。

优选的，构建含有鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因的重组表达载体的步骤中包括：采用正向引物F1和反向引物R1扩增所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因，且正向引物F1具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，反向引物R1具有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

优选的，所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因包含如下核苷酸序列，或由如下核苷酸序列组成：

a)SEQ ID NO：3所示核苷酸序列；或

b)SEQ ID NO：3所示核苷酸序列的互补序列、简并序列或同源序列；或

c)在严紧条件下与SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列杂交的多核苷酸序列或其互补序列。