[发明专利]一种基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒在审
| 申请号： | 202010736902.7 | 申请日： | 2020-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN111766389A | 公开（公告）日： | 2020-10-13 |
| 发明（设计）人： | 周景明;王爱萍;杨庆宝;程凯龙;祁艳华;刘红亮;陈玉梅;刘燕凯 | 申请（专利权）人： | 郑州大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/569;G01N33/58;C07K14/165;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 郑州异开专利事务所(普通合伙) 41114 | 代理人： | 王霞;韩鹏程 |
| 地址： | 450000 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 传染性 支气管炎 病毒 重组 蛋白 elisa 抗体 检测 试剂盒 | ||
1.一种基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：包括用于包被酶标板的IBV H120毒株重组N蛋白。
2.根据权利要求1所述的基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述IBV H120毒株重组N蛋白是由IBV H120的N基因序列设计引物扩增并构建表达菌株进行诱导表达。
3.根据权利要求2所述的基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述IBV H120毒株重组N蛋白通过原核表达系统E.coli Transetta表达，首先构建原核克隆载体pMD19-T-N，然后再构建原核表达载体pGEX-6P-1-N及诱导表达和纯化。
4.根据权利要求3所述的基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：构建所述原核克隆载体pMD19-T-N时，首先设计引物RT-PCR扩增IBV H120N基因，然后将N基因与pMD-19-T进行连接。
5.根据权利要求3所述的基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：构建所述原核表达载体pGEX-6P-1-N时，以pMD19-T-N为模板，PCR扩增N基因，将N基因与pGEX-6p-1连接。
6.根据权利要求1所述的基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括酶标试剂，封闭液，洗涤液，稀释液，阳性对照样品，阴性对照样品，显色液和终止液。
7.根据权利要求1所述的基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述酶标试剂为HRP标记的羊抗鸡IgG；所述封闭液为含5％脱脂奶的PBST；所述洗涤液为含0.05％Tween-20的PBST；所述稀释液为PBS；所述阳性对照样品为IBV 阳性鸡血清；所述阴性对照样品为阴性SPF鸡血清；所述显色液为酶底物TMB反应液；所述终止液为2M H2SO4。
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