[发明专利]一种基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，包括用于包被酶标板的IBV H120毒株重组N蛋白。该IBV H120毒株重组N蛋白通过原核表达系统E.coli Transetta（DE3）表达，首先构建原核克隆载体pMD19‑T‑N，然后再构建原核表达载体pGEX‑6P‑1‑N及诱导表达和纯化：设计引物RT‑PCR扩增IBV H120 N基因，然后将N基因与pMD‑19‑T进行连接，构建得到原核克隆载体pMD19‑T‑N；以pMD19‑T‑N为模板，PCR扩增N基因，将N基因与pGEX‑6p‑1连接，构建得到原核表达载体pGEX‑6P‑1‑N。本试剂盒具有成本低廉、使用简单方便、敏感性高且特异性强的优点，可以批量检测，为IBV抗体水平监测提供了一种可靠的检测手段。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒。

背景技术

传染性支气管炎（Infectious bronchitis，IB）是传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV)引起的禽类的一种急性、高度接触性传染病，是严重危害养禽业的重大传染病之一。IBV是一种变异性很强的冠状病毒，传播迅速、血清型众多，不同的血清型之间缺乏交叉保护。IBV在世界范围内呈广泛流行趋势,对全球家禽业造成了严重损失。

IBV基因组能够编码四种结构蛋白，具有重要的的生物学功能。其结构蛋白分别为：纤突糖蛋白(Spike protein, S)、核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein, N)、膜蛋白(Membrane protein, M)以及小囊膜蛋白(Envelope proteinn, E)。N蛋白是诱导机体免疫应答的重要蛋白，具有高度的保守性。N蛋白是IBV中唯一一个完全位于膜内部的结构蛋白，由409个氨基酸构成。N蛋白的功能主要是包裹病毒核酸从而构成病毒核衣壳，还可以进入宿主细胞核内部或抑制细胞因子，有助于IBV复制。

IBV的变异株以及新的血清型不断出现，使IB的诊断以及防治变得十分困难。目前IB的实验室诊断方法主要包括病毒分离培养、血清学诊断以及分子生物学诊断。国内目前IBV防控主要以接种灭活和弱毒疫苗为主，弱毒疫苗免疫效果优于灭活疫苗。但IBV易突变，弱毒疫苗可能会造成毒力反转，存在散毒风险。

酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)具有很高的灵敏性，其操作简单、快速。N蛋白具有很好的免疫原性，可诱导宿主体内产生高水平的抗体并介导细胞毒性T细胞效应，激活细胞毒性T淋巴细胞应答，而且还可以激活体内的辅助性T淋巴细胞。重组IBV毒株N蛋白作为检测抗原在抗体水平检测方面具有巨大优势。

发明内容

本发明的目的在于利用ELISA方法的检测优势，提供一种基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，用于IBV抗体检测，是一种可靠检测IBV抗体水平的工具。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的基于鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白的ELISA抗体检测试剂盒，包括用于包被酶标板的IBV H120毒株重组N蛋白。

所述IBV H120毒株重组N蛋白是由Genebank中已发表的IBV H120（accessionnumber：FJ888351）的N基因序列设计引物扩增并构建表达菌株进行诱导表达。