[发明专利]双重实时荧光定量PCR鉴定布鲁氏菌S2疫苗株的方法及其使用的成套试剂

说明书

本发明公开了双重实时荧光定量PCR鉴定布鲁氏菌S2疫苗株的方法及其使用的成套试剂。成套试剂由引物Bru‑F1、引物Bru‑R1、探针Bru‑Probe1、引物S2‑F2、引物S2‑R2和探针S2‑Probe2组成，核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1—SEQ ID NO:6所示。与其他布鲁氏菌核酸检测方法相比，本发明建立的方法是直接通过荧光信息对布鲁氏菌S2疫苗株进行定性、定量，且同时进行分析鉴定，具有便捷、准确、灵敏、特异等优点，大大缩短了检测时间，对于布鲁氏菌病的防控具有重大的应用价值，有助于从源头控制疫情、有效预防布病疫情的大规模爆发，保障畜牧业的发展和公共卫生安全。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及双重实时荧光定量PCR鉴定布鲁氏菌S2疫苗株的方法及其使用的成套试剂。

背景技术

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌(Brucella spp.)引起的一种重要的人畜共患传染病。布病在畜群和人间布病感染率逐年上升，并在维持在较高水平，持续对公共卫生安全和畜牧业的发展构成危害。

疫苗免疫是流行率较高的地区控制布鲁氏菌病的最有效的方法之一。根据原农业部和卫计委印发的《国家布鲁氏菌病防治计划(2016-2020年)》的相关规定，对一类地区的牛羊场群采取全面免疫，奶畜原则上不免疫的措施。我国目前使用的布病疫苗主要有布鲁氏菌A19疫苗、布鲁氏菌S2疫苗和布鲁氏菌M5疫苗。其中布鲁氏菌S2疫苗是使用最多的布病疫苗，同时也是唯一一种可以对怀孕动物进行免疫的疫苗。

动物布病的检测主要以血清学检测方法为主，但是现有血清学检测方法与大肠杆菌、耶尔森菌的部分血清型存在交叉反应，同时我国所使用的布病疫苗产生的免疫抗体和野毒株自然感染抗体无法进行区分。截止目前，还没有一种能快速鉴定布鲁氏菌S2疫苗株的鉴定方法。

荧光定量PCR技术(Quantitative Real-time PCR，qPCR)是一种对基因组进行检测的相对定量技术。与普通PCR技术相比，qPCR增加了一个两端带有荧光标记的寡核苷酸探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知的模板进行定量分析。荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、定量准确的优点，可以利用多种荧光基团实现多种基因的检测，并可利用寡核苷酸探针实现相似性较高基因的检测。目前，qPCR已广泛用于人类传染病的诊断和病原定量、以及动物病原体的检测、畜禽产品的检验检疫、生物制品的检测等领域。因此，基于布鲁氏菌S2疫苗株和其它布鲁氏菌基因组水平的差异，建立一种准确、特异、快速地鉴定布鲁氏菌S2疫苗株的荧光定量PCR方法对于布病的防控具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是鉴定布鲁氏菌S2疫苗株。

本发明首先保护鉴定布鲁氏菌S2疫苗株的成套试剂，可为成套试剂2和/或成套试剂1。

所述成套试剂2可包括引物Bru-F1、引物Bru-R1、探针Bru-Probe1、引物S2-F2、引物S2-R2和探针S2-Probe2。

所述成套试剂1可包括所述引物Bru-F1、所述引物Bru-R1、所述探针Bru-Probe1、引物S2-F1、引物S2-R1和探针S2-Probe1。

所述引物Bru-F1的核苷酸序列可如SEQ ID NO:1所示。

所述引物Bru-R1的核苷酸序列可如SEQ ID NO:2所示。

所述探针Bru-Probe1的核苷酸序列可如SEQ ID NO:3所示。

所述引物S2-F2的核苷酸序列可如SEQ ID NO:4所示。

所述引物S2-R2的核苷酸序列可如SEQ ID NO:5所示。

所述探针S2-Probe2的核苷酸序列可如SEQ ID NO:6所示。