[发明专利]一类苯丙氨酸来源的细胞松弛素及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种如式(Ⅰ)所述化合物的制备方法，

所述制备步骤如下：

S1、将真菌三尖杉叶子内生真菌接种于YMG培养基，140rpm，28℃培养5天，得到种子液；之后将其按每瓶10mL接种量加入大米培养基，于28℃恒温培养3周；

S2、待发酵结束，切碎培养基；使用EtOAc室温浸提5次，减压蒸馏除去溶剂，从而获得粗浸膏；

S3、使用大孔树脂对该粗浸膏进行分段，用30％,50％,80％,95％EtOH作为流动相梯度洗脱，获得4个组分Fr.1–4，依次对应为30％,50％,80％,95％EtOH洗脱相；

S4、Fr.3使用正相硅胶柱进行分段，流动相为石油醚/乙酸乙酯的混合溶剂梯度洗脱，体积比依次为10:1，5:1，2:1，1:1，1:2，通过TLC检测，将相似的样品进行合并，得到7个组分Fr.3A–3G，Fr.3A对应10：1，Fr.3B对应5：1，Fr.3C和Fr.3D对应2：1，Fr.3E对应1：1，Fr.3F对应1：2，Fr.3G对应样品部位；

S5、Fr.3B使用HPLC，其中MeCN/H₂O＝7:3,v/v；进行分离，得到了化合物Xs-1(XylariasinA)，t_R＝30min；

S6、使用高效液相纯化Fr.3E的过程中，即MeCN/H₂O＝23:17,v/v，得到了化合物Xs-4(6,7-Dihydro-7-oxo-cytochalasin C)，t_R＝50min；Xs-3(Cytochalasin C)，t_R＝60min；

S7、化合物Xs-2(12-Hydroxyl zygosporin G)，t_R＝18min；Xs-5(Zygosporin E)，t_R＝32min；在使用高效液相纯化Fr.3F的过程中MeCN/H₂O＝101:99,v/v获得。

2.根据权利要求1所述的一种如式(Ⅰ)所述化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，YMG培养基的制备方法为：酵母提取物4g,麦芽提取物10g，葡萄糖10g，蒸馏水1L，121℃灭菌30min，放冷即得。

3.根据权利要求1所述的一种如式(Ⅰ)所述化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，大米培养基的制备方法为：称取80g大米于1L锥形瓶中，加入4g蔗糖，120mL蒸馏水，封口于121℃灭菌30min，放冷即得。

4.根据权利要求3所述的一种如式(Ⅰ)所述化合物的制备方法，其特征在于，所述S5、S6、S7中半制备液相色谱的液相色谱仪为Waters 1525，流动相为乙腈-水或甲醇-水，流速为2mL/min，检测器为Waters 2998光电二极管阵列检测器，检测波长为200-400nm，色谱柱为Waters Sunfire C18半制备柱，规格为10×250mm。