[发明专利]一种钩吻中生物碱含量的测定方法

权利要求书

1.一种钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)供试品溶液制备：取经粉碎的钩吻样品，加入盐酸水溶液，超声提取，离心后吸取其上清液至已活化的MCX固相萃取柱中富集目标物，经淋洗、洗脱、吹干后加入甲醇水溶解残渣，过有机滤膜后得到供试品溶液；

(2)标准曲线的绘制：取生物碱标准品用甲醇溶解制成标准溶液；利用标准溶液绘制标准曲线；

(3)供试品溶液的测定：吸取所述供试品溶液进行色谱梯度洗脱；然后根据色谱梯度洗脱确定目标物质母离子后进行质谱扫描，得到钩吻中生物碱含量的测定值；

所述钩吻样品为钩吻植株的花、叶、根或茎；所述目标物为待测量的生物碱。

2.根据权利要求1所述的钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于：在所述步骤(1)中，所述盐酸水溶液的质量浓度为1％的盐酸水溶液，所述钩吻样品和盐酸水溶液的质量比为1:50。

3.根据权利要求1所述的钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于：在所述步骤(1)中，所述超声处理为在≥100W，40kHz的条件下至少处理30min；所述离心处理为≥3000r/min的条件下至少处理5min。

4.根据权利要求1所述的钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于：在所述步骤(1)中，上清液吸取至MCX固相萃取柱中富集前需要用大于上清液的甲醇和水对MCX固相萃取柱进行活化；并弃去流出液后干燥MCX固相萃取柱。

5.根据权利要求1所述的钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于：在所述步骤(1)中，所述洗脱用大于上清液量的5％质量的氨化甲醇洗脱，收集洗脱液并在≥40℃下用惰性气体吹干；然后加入含有甲酸的甲醇水溶液溶解残渣，并过孔径≤0.22μm有机滤膜，得到供试品溶液。

6.根据权利要求1所述的钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于：在所述步骤(2)中，生物碱标准品用甲醇的比例溶解制成1mg/ml标准储备液，然后将标准储备液用含有甲酸的甲醇水稀释成4ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、100ng/ml、200ng/ml的标准工作溶液；然后用各生物碱测定所得的峰面积与标准工作溶液的浓度绘制标准曲线。

7.根据权利要求1所述的钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，色谱梯度洗脱程序如下：

梯度时间为0min，流动相A:流动相B＝85％:15％

梯度时间为1.50min，流动相A:流动相B＝55％:45％

梯度时间为2.00min，流动相A:流动相B＝10％:90％

梯度时间为2.50min，流动相A:流动相B＝0％:100％

梯度时间为3.50min，流动相A:流动相B＝0％:100％

梯度时间为3.51min，流动相A:流动相B＝85％:15％

梯度时间为5.50min，流动相A:流动相B＝85％:15％

其中流动相A为0.1％质量的甲酸水溶液，流动相B为乙腈；流速为0.4ml/min；柱温为35℃。

8.根据权利要求1所述的钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，质谱扫描的条件为：

离子源：ESI源

检测方式：多反应离子监测

毛细管电压：正离子模式，3500V

离子源温度：150℃

干燥气流量：15L/min

雾化气压力：25Psi

鞘气温度：350℃

鞘气流量：12L/min

鞘气：氮气。

9.根据权利要求1所述的钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，所述目标物质母离子分别为：273.1m/z、295.1m/z、307.2m/z、317.2m/z、323.1m/z、327.2m/z、339.2m/z、341.2m/z、353.1m/z、353.2m/z、355.2m/z。

10.根据权利要求1-9任一所述的钩吻中生物碱含量的测定方法，其特征在于：钩吻中生物碱包括：钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素戊、钩吻素己、(Z)-阿枯米定碱、钩吻绿碱、兰金断肠草碱、胡蔓藤碱乙、胡蔓藤碱丁、N-甲氧基无水老刺木碱二醇和常绿钩吻碱。