[发明专利]一种基于N端编码序列改造调控蛋白质表达的方法

权利要求书

1.一种筛选编码蛋白的核苷酸序列的方法，其特征在于，测定GC3和ΔG的值，再应用下述方程式计算蛋白的相对表达量，即P_sfGFP值；P_sfGFP值与蛋白的实际表达量成正相关：

P_sfGFP＝274497.657－108717.401×GC3+4886.529×ΔG；

所述GC3为目的基因靠近ATG的N端编码区前10个氨基酸的同义密码子第三位碱基是GC的含量；所述ΔG为目的基因的启动子转录起始位点至N端编码区的第96bp区域间的mRNA二级结构的最小自由能；

蛋白表达量需要上调的时候，选择突变库中的P_sfGFP值处于前10％的核苷酸序列；

蛋白表达量需要下调的时候，选择突变库中的P_sfGFP值处于后10％的核苷酸序列；

所述目的基因的启动子为PLytr；所述蛋白在枯草芽孢杆菌WB600中表达。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白为能够在枯草芽孢杆菌中表达的任意蛋白。

3.一种调控基因工程菌蛋白表达量的方法，其特征在于，取目的蛋白N端编码区前30个核苷酸，建立同义突变库；计算同义突变库中的基因的参数GC3和ΔG，根据方程计算每个核苷酸序列的相对表达量，选择具有所需表达量的核苷酸序列，将目的蛋白N端编码区进行相应突变，并将其转化到宿主细胞中；

所述方程为：P_sfGFP＝274497.657－108717.401×GC3+4886.529×ΔG；

所述GC3为目的基因靠近ATG的N端编码区前10个氨基酸的同义密码子第三位碱基是GC的含量；所述ΔG为目的基因的启动子转录起始位点至N端编码区的第96bp区域间的mRNA二级结构的最小自由能；

蛋白表达量需要上调的时候，选择突变库中的P_sfGFP值处于前10％的核苷酸序列；

蛋白表达量需要下调的时候，选择突变库中的P_sfGFP值处于后10％的核苷酸序列；

所述目的基因的启动子为PLytr；所述蛋白在枯草芽孢杆菌WB600中表达。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白为能够在枯草芽孢杆菌中表达的任意蛋白。

5.一种调控普鲁兰酶表达量的方法，其特征在于，选取普鲁兰酶N端编码区前30个核苷酸，进行同义突变，构建突变体库，并计算P_sfGFP值，根据P_sfGFP值选择相应的同义突变序列；将目的蛋白的N端编码区进行相应突变，连接至表达载体，构建重组质粒；

所述P_sfGFP值与蛋白的实际表达量成正相关：

P_sfGFP＝274497.657－108717.401×GC3+4886.529×ΔG；

所述GC3为目的基因靠近ATG的N端编码区前10个氨基酸的同义密码子第三位碱基是GC的含量；所述ΔG为目的基因的PLytr启动子转录起始位点至N端编码区的第96bp区域间的mRNA二级结构的最小自由能；

普鲁兰酶表达量需要上调的时候，选择突变库中的P_sfGFP值处于前10％的核苷酸序列；

普鲁兰酶表达量需要下调的时候，选择突变库中的P_sfGFP值处于后10％的核苷酸序列；

所述蛋白在枯草芽孢杆菌WB600中表达。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将重组质粒导入枯草芽孢杆菌，利用枯草芽孢杆菌生产蛋白。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述普鲁兰酶NCBI登录号为AMQ67157。

8.权利要求1～4任一所述方法在调节目的蛋白表达量中的应用。