[发明专利]基因G20E03、其编码的蛋白及其在提高烟草植株抗大豆孢囊线虫病中的应用

权利要求书

1.基因G20E03在提高烟草植株抗大豆孢囊线虫病中的应用，其特征在于，所述基因G20E03的基因全长序列如SEQ ID NO.1所示；通过转基因技术获得基因G20E03的RNAi转基因烟草植株，在转基因烟草植株中表达基因G20E03的dsRNA，使大豆孢囊线虫基因G20E03沉默，缓解基因G20E03对烟草植株的免疫抑制作用，提高烟草植株的抗大豆孢囊线虫病性。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述通过转基因技术获得基因G20E03的RNAi转基因烟草植株包括以下步骤：

构建重组表达载体pFGC5941-RNAi-G20E03；

将重组表达载体pFGC5941-RNAi-G20E03转化农杆菌LBA4404，得到重组农杆菌；

通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草，进行组织培养，分别利用引物G20E03-part-F和G20E03-part-R、Bar-F和Bar-R检测均为阳性的转基因烟草植株即为G20E03的RNAi转基因烟草植株。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述构建重组表达载体pFGC5941-RNAi-G20E03包括以下步骤：

以大豆孢囊线虫cDNA为模板，采用RACE法克隆G20E03基因，得到完整的基因序列；

设计引物对G20E03-ORF-R-F和G20E03-ORF-R-R，PCR扩增得到含Xbal和BamH I酶切位点的ORF反向序列，分别使用限制性内切酶Xbal和BamH I进行酶切，纯化回收后，连接至经限制性内切酶Xbal和BamH I酶切的植物干扰载体pFGC5941，获得重组表达载体pFGC5941-G20E03；

设计引物对G20E03-ORF-F-F和G20E03-ORF-F-R，PCR扩增得到含Nco I和Swa I酶切位点的ORF正向序列，分别使用限制性内切酶Nco I和Swa I对重组表达载体pFGC5941-G20E03进行酶切，纯化回收后，连接至经限制性内切酶Nco I和Swa I酶切的载体pFGC5941-G20E03，获得重组表达载体pFGC5941-RNAi-G20E03。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，通过转基因技术获得基因G20E03的RNAi转基因烟草植株还包括：

将T0代转基因烟草种子采用种子穴盘育苗，并分别利用特异性引物G20E03-part-F和G20E03-part-R、Bar-F和Bar-R进行PCR检测，得到T1代转基因烟草；

按照上述方法逐代培养，得到纯合的转基因株系。