[发明专利]一种赖氨酰肽链内切酶的纯化方法在审
| 申请号： | 202010743500.X | 申请日： | 2020-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN111778231A | 公开（公告）日： | 2020-10-16 |
| 发明（设计）人： | 姚元锋;张超;浣茂萌;夏玉平;杨洁婷;赖红星 | 申请（专利权）人： | 珠海冀百康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/52 | 分类号： | C12N9/52 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 谢晓华 |
| 地址： | 519000 广东省珠海市金湾区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 赖氨酰肽链内切酶 纯化 方法 | ||
1.一种赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、用平衡液平衡硅胶层析填料，将赖氨酰肽链内切酶粗品上样，用平衡液再次平衡硅胶层析填料；所述平衡液由体积百分比为70～90％的A液和10～20％的B液组成；
S2、使用A液-B液梯度洗脱，紫外线监测，收集主峰流出液，得到高纯度赖氨酰肽链内切酶；
其中，所述A液为缓冲盐的水溶液，所述B液为三氟乙酸的有机溶液。
2.根据权利要求1所述的赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：所述A液的pH值为2.0～4.0。
3.根据权利要求1所述的赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：所述缓冲盐为柠檬酸盐、乙酸盐、甘氨酸盐中的一种或任意两种以上的混合。
4.根据权利要求1所述的赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：所述B液是将三氟乙酸溶于有机溶剂中配制而成，所述有机溶剂为乙腈、乙醇、甲醇、异丙醇中的一种或任意两种以上的混合。
5.根据权利要求4所述的赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：所述B液中三氟乙酸的体积分数为0.5-5‰。
6.根据权利要求1所述的赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：所述硅胶层析填料的配基为C4-C8的烷烃。
7.根据权利要求6所述的赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：所述硅胶层析填料的平均孔径为
8.根据权利要求1所述的赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：所述赖氨酰肽链内切酶粗品的上样量为2～8g/L硅胶层析填料。
9.根据权利要求1所述的赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：所述紫外线的波长为200～280nm。
10.根据权利要求1所述的赖氨酰肽链内切酶的纯化方法，其特征在于：所述步骤S2洗脱过程中A液的体积比范围由50～60％变化为30～80％。
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