[发明专利]VIPERIN功能缺失的细胞系的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了用于特异性靶向DF‑1细胞VIPERIN基因的sgRNA、用于CRISPR/Cas9编辑DF‑1细胞VIPERIN基因的质粒，以及VIPERIN功能缺失的细胞系的构建方法，成功构建得到了VIPERIN功能缺失的DF‑1细胞系，为VIPERIN的分子生物学功能研究、VIPERIN抗病毒机制研究、和/或抗病毒药方面研发提供了基础。

技术领域

本发明涉及VIPERIN功能缺失的细胞系的构建方法及其应用，更具体地，涉及利用CRISPR/Cas9技术构建VIPERIN功能缺失的DF-1细胞系的方法，构建得到的DF-1细胞系，以及该细胞系的应用。

背景技术

VIPERIN是一种与内质网相关的干扰素(IFN)诱导型病毒抑制蛋白，该蛋白基因又称之为RSAD2(含自由基SAM结构域2)。据报道，VIPERIN可以通过IFN依赖性或非IFN依赖性途径来诱导。

VIPERIN受干扰素调控，其蛋白的功能表现在对多种DNA和RNA病毒的抑制，包括CHIKV，HCMV，HCV，DENV，WNV，SINV，流感和HIV。VIPERIN最初在人巨细胞病毒(HCMV)感染的巨噬细胞中被鉴定为IFN-γ诱导的抗病毒蛋白，据报道，VIPERIN可以由成纤维细胞中的HCMV糖蛋白B诱导表达。VIPERIN通过下调病毒结构蛋白表达来抑制HCMV病毒复制。VIPERIN也可与HCMV病毒蛋白相互作用，并重新定位到HCMV病毒感染细胞的线粒体中，从而通过破坏细胞代谢来增强病毒的感染性。

VIPERIN是一种多功能蛋白。VIPERIN蛋白是一种自由基SAM酶，该酶能够产生链终止子ddhCTP(3′-脱氧-3'，4′didehydro-CTP)，从而抑制病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)活性。VIPERIN可以阻断氨基酸的代谢和线粒体呼吸。据报道VIPERIN通过减少异戊二烯生物合成途径中的必需酶，法呢基二磷酸合酶(FPPS)的酶活性来破坏细胞质膜上的脂筏，从而抑制流感病毒的出芽和释放。VIPERIN还可通过与宿主蛋白hVAP-33和NS5A相互作用来破坏复制复合体的形成，从而抑制HCV病毒的复制。

总而言之VIPERIN在多种病毒的感染过程中表现出强有力的抗病毒作用。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种用于特异性靶向DF-1细胞VIPERIN基因的sgRNA。

本发明的目的之二在于提供一种用于CRISPR/Cas9编辑DF-1细胞VIPERIN基因的质粒。

本发明的目的之三在于提供一种VIPERIN功能缺失的细胞系的构建方法。

本发明的目的之四在于提供一种VIPERIN功能缺失的DF-1细胞系。

本发明的目的之五在于提供VIPERIN功能缺失的DF-1细胞系的应用。

为达到上述目的之一，本发明提供如下技术方案一：

一种用于特异性靶向DF-1细胞VIPERIN基因的sgRNA，所述sgRNA序列如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示。

为达到上述目的之二，本发明提供如下技术方案二：

一种用于CRISPR/Cas9编辑DF-1细胞VIPERIN基因的质粒，所述质粒含有sgRNA，所述如sgRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

作为上述方案的进一步改进，所述质粒由所述sgRNA和PX459载体连接得到。

需要额外说的是：PX459并不是唯一可选的载体，比如lentiCRISPR v2-dCas9；All-in-one-CRISPR/Cas9-LacZ等；

为达到上述目的之三，本发明提供如下技术方案三：