[发明专利]靶向敲除TNFα基因的sgRNA和敲除TNFα基因的猪胚胎成纤维细胞系及其应用

权利要求书

1.一种靶向敲除TNFα基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的靶点序列为如SEQ IDNO：1所示的核苷酸序列。

2.编码权利要求1所述sgRNA的DNA分子。

3.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料包括权利要求1所述sgRNA，所述生物材料为载体、表达盒或转基因细胞中的一种或多种。

4.一种敲除了TNFα基因的细胞系的构建方法，其特征在于，包括：

利用CRISPR-Cas9系统敲除所述细胞系的TNFα基因，所述CRISPR-Cas9系统使用的sgRNA的靶点序列为如SEQ ID NO：1所示的序列。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述利用CRISPR-Cas9系统敲除所述细胞系的TNFα基因中使用pX330载体。

6.根据权利要求4或5所述的构建方法，其特征在于，所述细胞系为猪胚胎成纤维细胞系。

7.一种猪胚胎成纤维细胞系，其特征在于，所述猪胚胎成纤维细胞系由权利要求4-6任一项所述构建方法构建得到。

8.用于鉴定权利要求7所述猪胚胎成纤维细胞系的突变类型的引物对，其特征在于，所述引物对包括：

核苷酸序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的引物。

9.权利要求7所述猪胚胎成纤维细胞系在制备免疫和炎症反应的疾病研究模型中的应用。

10.权利要求7所述猪胚胎成纤维细胞系在转基因猪制备中的应用。