[发明专利]靶向敲除FRZB基因的双sgRNA和敲除FRZB基因的猪成纤维细胞系及其应用有效
| 申请号： | 202010746768.9 | 申请日： | 2020-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN111944811B | 公开（公告）日： | 2022-02-11 |
| 发明（设计）人： | 张博;付玉;张盼;商鹏;张然;张浩 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N15/85;C12N5/10;C12N15/11;C12Q1/6888;C12Q1/02;A01K67/027;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 钱云 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 frzb 基因 sgrna 纤维 细胞系 及其 应用 | ||
1.靶向FRZB基因的双sgRNA组合，其特征在于，包括FRZB-sgRNA1和FRZB-sgRNA2；
所述FRZB-sgRNA1的靶向序列为：CAGCACTCAGGCCAACGCCA，
所述FRZB-sgRNA2的靶向序列为：CTCGTGGCCGGAAAGCCTGGC。
2.根据权利要求1所述的双sgRNA组合，其特征在于，所述FRZB-sgRNA1的核苷酸序列为：
FRZB-sgRNA1 Oligo1：5'-CACCgTGGCGTTGGCCTGAGTGCTG-3' ，
FRZB-sgRNA1 Oligo2：5'-AAACCAGCACTCAGGCCAACGCCAC-3' ；
所述FRZB-sgRNA2的核苷酸序列为：
FRZB-sgRNA2 Oligo1：5'-CACCgCCAGGCTTTCCGGCCACGAG-3' ，
FRZB-sgRNA2 Oligo2：5'-AAACCTCGTGGCCGGAAAGCCTGGC-3' 。
3.用于编码权利要求1或2所述双sgRNA组合的DNA分子。
4.一种生物材料，其特征在于，包括权利要求1或2所述双sgRNA组合，所述生物材料为载体、表达盒或转基因细胞中的一种或多种。
5.一种敲除了FRZB基因的细胞系的构建方法，其特征在于，包括：利用CRISPR/Cas9系统敲除所述细胞系的FRZB基因，所述CRISPR/Cas9系统使用的sgRNA为权利要求1或2所述的双sgRNA组合。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述利用CRISPR/Cas9系统敲除所述细胞系的FRZB基因中使用pX330载体，
和/或，
所述细胞系为猪成纤维细胞系。
7.一种猪成纤维细胞系，其特征在于，所述猪成纤维细胞系由权利要求5或6所述方法构建得到。
8.用于鉴定权利要求7所述猪成纤维细胞系的突变类型的引物对，其特征在于，所述引物对包括如SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的引物。
9.权利要求7所述猪成纤维细胞系在制备FRZB基因功能研究模型中的应用。
10.权利要求7所述猪成纤维细胞系在转基因猪的制备中的应用。
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