[发明专利]一种油用牡丹优良品种DNA指纹图谱数据库的构建方法及其专用引物对组合在审
| 申请号： | 202010747780.1 | 申请日： | 2020-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN111690768A | 公开（公告）日： | 2020-09-22 |
| 发明（设计）人： | 陈赢男;曹佳卉;戴晓港;李淑娴;尹佟明 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;G16B50/30;G16B25/20;G06K19/06 |
| 代理公司： | 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 牡丹 优良品种 dna 指纹 图谱 数据库 构建 方法 及其 专用 引物 组合 | ||
1.一种用于构建油用牡丹DNA指纹图谱的专用引物对组合，其特征在于，各专用引物对序列如下所示：
2.权利要求1所述的用于构建油用牡丹DNA指纹图谱的专用引物对组合在构建油用牡丹DNA指纹图谱中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：利用专用引物对组合分别对油用牡丹基因组DNA进行PCR扩增，将扩增产物进行毛细管电泳得到扩增带型，即为该油用牡丹的DNA指纹图谱。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系包括：模板DNA25ng，5′端有荧光基团FAM标记的上、下游引物各20ng，200μM dNTP，0.5U Taq聚合酶，1.5μL 10×PCR buffer，加灭菌去离子水补充反应体积到15μL。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性2min；然后94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸1min，进行30个循环；循环结束后，72℃延伸5min。
6.一种油用牡丹DNA指纹图谱数据库的构建方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(1)提取某一油用牡丹样品的基因组DNA；
(2)分别用权利要求1所述的第1-10对引物对油用牡丹DNA样品进行PCR扩增，得到扩增产物；
(3)利用毛细管电泳检测上述扩增产物，按照片段从小到大的方向读取第1-10对引物的扩增带型；
(4)记录第1-10对引物扩增条带的大小，省略单位，如果一对引物同时扩增出2条以上条带，则用“-”连接；如果没有扩增出条带则以“0”表示，数字串前面加上表示引物名称的字母即得到油用牡丹DNA对应上述第1-10对引物的第1-10个编号，串联上述第1-10个编号形成由字母、阿拉伯数字和连字符组成的字符串，由此得到该油用牡丹样品的DNA指纹代码；
(5)生成指纹图谱二维码，利用二维码技术处理油用牡丹样品的DNA指纹代码，将其转化成为二维码图形，作为该种油用牡丹的电子身份证。
7.权利要求6所述的油用牡丹DNA指纹图谱数据库的构建方法得到油用牡丹优良品种DNA指纹图谱数据库，如下表所示：
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