[发明专利]一种油用牡丹优良品种DNA指纹图谱数据库的构建方法及其专用引物对组合

说明书

本发明公开了一种油用牡丹优良品种DNA指纹图谱数据库的构建方法及其专用引物对组合，属于生物技术领域。该方法包括：提取油用牡丹基因组DNA；SSR引物PCR扩增反应及扩增产物的毛细管电泳；读取谱带信息建立油用牡丹DNA数字身份证；数字代码转换成二维码图片建立油用牡丹电子身份证。本发明提供的构建油用牡丹DNA指纹图谱的方法，操作简单、快速，结果可靠、稳定、准确；所提供的87份油用牡丹优良品种的指纹图谱数据库，每一个油用牡丹品种的DNA指纹信息具有唯一性，不仅可以为鉴定油用牡丹良种的真实性提供技术依据，对油用牡丹种苗生产的监督检查，对新品种的认定，以及对育种工作者知识产权的保护具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地说，涉及一种油用牡丹优良品种DNA指纹图谱库的构建方法及其专用引物对组合。

背景技术

牡丹为芍药属(Paeonia)牡丹组(Sect.Moutan DC)植物的统称，为多年生落叶灌木。油用牡丹是指可用于生产种子加工食用牡丹油的牡丹类型，或产籽出油率≥22％品种的牡丹品种。牡丹籽油中不饱和脂肪酸含量高达92.26％，其中α-亚麻酸含量43.18％(是大豆油的6倍)，油酸含量21.93％，亚油酸含量27.15％。同时，牡丹籽油还含有丹皮酚、芍药皂苷、牡丹多糖、岩藻甾醇、角鲨烯等营养物质，多项指标均超过橄榄油，是优质食用油。国家卫生部已于2011年批准牡丹籽油为新资源食品。2014年国务院发布《关于加快木本油料产业发展的实施意见》，明确将牡丹列为第三大木本油料作物。油用牡丹作为我国全力推广的新兴木本油料作物，栽植面积和范围迅速增长，目前最受欢迎的油用牡丹品种包括凤丹(P.ostii)和紫斑牡丹(P.rockii)。在油用牡丹产业蓬勃发展过程中，真实可靠的优良品种是保证油用牡丹产业持续健康发展的基础和关键。

DNA指纹图谱是利用分子标记建立的能够鉴别生物个体之间差异的DNA电泳图谱，可以快速、准确地鉴定植物品种的真实性和纯度，且具有个体特异性高、环境稳定性好等特点，在植物遗传育种和品种保护方面发挥重要作用。SSR(simple sequence repeat)是一种真核生物基因组中普遍存在的重复序列，由长度为1-6bp串联重复序列组成。SSR标记是基因组中变异速率最快的序列，具有高度的特异性和多态性，是用于构建DNA指纹图谱最为适宜的分子标记。利用SSR分子标记技术构建油用牡丹优良品种的指纹图谱不仅可以为鉴定油用牡丹良种的真实性提供技术依据，对油用牡丹种苗生产的监督检查，对新品种的认定，以及对育种工作者知识产权的保护具有重要意义。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于构建油用牡丹DNA指纹图谱的专用引物对组合。本发明所要解决的另一技术问题在于提供一种油用牡丹优良品种DNA指纹图谱数据库的构建方法。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种用于构建油用牡丹DNA指纹图谱的专用引物对组合，各专用引物对序列如下所示：

所述的用于构建油用牡丹DNA指纹图谱的专用引物对组合在构建油用牡丹DNA指纹图谱中的应用。

进一步地，利用所述的第1-10个引物对分别对油用牡丹基因组DNA进行PCR扩增，将扩增产物进行毛细管电泳得到扩增带型，即为该油用牡丹的DNA指纹图谱。

进一步地，所述PCR扩增的反应体系包括：模板DNA25ng，5′端有荧光基团FAM标记的上、下游引物各20ng，200μM dNTP，0.5U Taq聚合酶，1.5μL 10×PCR buffer，加灭菌去离子水补充反应体积到15μL。

进一步地，所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性2min；然后94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸1min，进行30个循环；循环结束后，72℃延伸5min。