[发明专利]检测用新型冠状病毒核酸假病毒标准物质及其制备方法

说明书

一种新型冠状病毒(2019‑nCoV，或称SARS‑CoV‑2)核酸检测用假病毒标准物质及其制备方法。将新型冠状病毒核酸整合至慢病毒表达质粒载体中，然后将构建的慢病毒表达质粒与包装质粒共同转染至细胞中，经细胞表达后得到大量包装了新冠病毒RNA的假病毒颗粒。通过DNase I消化和蔗糖密度梯度超速离心去除质粒DNA后，冷冻干燥获得假病毒颗粒冻干物。本发明既有包装了病毒的部分RNA序列，又有包装了全部序列的假病毒标准物质，能完全模拟病毒RNA提取和核酸检测全过程，可用于新冠病毒核酸定性和定量检测方法的验证评价以及实验室质量控制。得到的标准物质具有纯度高、安全性好和量值准确等特性，并且稳定性好，可以常温条件运输，为标准物质的量值溯源传递提供了保障。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种检测用新型冠状病毒核酸假病毒标准物质及其制备方法。

背景技术：

目前，新型冠状病毒（2019-nCoV，亦称为SARS-CoV-2）感染在全球范围内大流行，急需对大量的人群感染新型冠状病毒情况进行持续的检测。

聚合酶链反应（PCR）被认为是新型冠状病毒肺炎病人确诊的“金标准”，而目前新型冠状病毒PCR检测试剂质量参差不齐，对新型冠状病毒的检测造成较大影响，急需解决。

为了能够对各厂家生产的检测PCR试剂进行标准化的质量控制，中国计量科学研究院于2020年2月紧急研制了2种不同浓度的新冠病毒核酸标准物质（GBW(E)0910890~90）和2种不同浓度的新冠病毒核酸基因组标准物质（GBW(E)0910898~99）。

然而，上述新冠病毒核酸标准物质是RNA转录子和RNA基因组形式，有以下缺点：

1）稳定性不好

现有新冠病毒核酸标准物质是裸露RNA状态的标准物质，很容易被环境中RNA酶降解，导致检测误差；

2）无法模拟新冠病毒核酸提取过程

新冠病毒核酸检测时需要先从咽拭子、痰液等样本中提取病毒核酸，然后进行PCR扩增来检测。而裸露RNA标准无法代替真实病毒检测过程，比如核酸提取效率只有70%，而直接用裸露RNA进行检测是无法来评价提取效率的。

3）标准物质贮存要求严苛

因为是裸露的RNA，必须贮存在-70℃以下，对于基层单位使用很不方便。

因此，如果能够构建一种新型冠状病毒的假病毒标准物质，就能够模拟病毒从RNA提取至核酸扩增检测步骤全过程，可以解决以上问题。

发明内容：

（一）要解决的技术问题

本发明的目的是提供一种新型冠状病毒（2019-nCoV，或称SARS-CoV-2）假病毒标准物质及其制备方法。

（二）技术方案

本发明制备了一种新型冠状病毒核酸检测用假病毒标准物质，该标准物质中，包括蛋白包裹RNA的假病毒颗粒，所述RNA选自以下：

SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3中任选1～3个核苷酸片段；或SEQ ID NO.4所示序列的核酸。

所述RNA包括了2019-nCoV（或SARS-CoV-2）全部基因序列和几个RNA片段（可能包括ORF1a/b、N、E等基因序列片段）。

本发明得到的假病毒标准物质，由以下组分组成：

1）蛋白包裹前述RNA的假病毒颗粒和病毒保护剂制成的假病毒冻干物；

2）用于假病毒冻干物复溶的无RNA酶水溶液。