[发明专利]基于液质联用技术快速鉴定肉样的动物源性成分的方法

权利要求书

1.基于液质联用技术快速鉴定肉样的动物源性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、建立不同动物源性肉类中高丰度蛋白质的靶标特征多肽数据库；

S2、对待测肉样进行前处理，得到待测肉样的多肽样品；

S3、采用液相色谱串联质谱检测S2得到的待测肉样的多肽样品，并与S1所述数据库中的靶标特征多肽进行比较，从而鉴定所述待测肉样的动物源性成分；

其中，S2中，所述前处理包括以下步骤：

(1)提取样品高丰度蛋白：向待测肉样中加入提取液和磁珠，用均质仪以1000～2600rad/min的转速均质2～5min，然后离心取上清液；

(2)向步骤(1)取得的上清液中加入NH₄HCO₃和胰蛋白酶进行酶解，加入甲酸终止反应，摇匀过膜上机分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取液为0.04～0.06mol/L Tris-HCl、5～6mol/L尿素、1～3mol/L硫脲。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以2g肉样计，所述提取液的添加量为15～25mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，按照每个肉样4～6个磁珠的比例，加入适量的磁珠。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述离心的转速为10000～14000r/min，离心时间为10～30min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)具体为：取20～100μL上清液，加入1～3mL质量分数为0.5～2％的NH₄HCO₃溶液，加入20～60μL质量浓度100μg/mL胰蛋白酶，30～45℃下酶解0.5～2h后，加入200μL质量分数为5～15％的甲酸溶液终止反应，静止10～30min，摇匀过滤膜上机分析。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S1包括以下步骤：

1)对不同动物源性肉类的标准肉样分别进行前处理，以便得到不同动物源性肉类的多肽样品；

2)采用液相色谱串联高分辨质谱分别检测步骤1)得到的不同动物源性肉类的多肽样品，筛选出不同动物源性肉类中高丰度蛋白质的特征多肽数据库；

3)采用液相色谱串联普通质谱分别检测步骤1)得到的不同动物源性肉类的多肽样品，得到多肽样品中不同多肽的质谱响应值；

4)根据步骤3)得到的不同多肽的质谱响应值，从步骤2)的不同动物源性肉类中高丰度蛋白质的特征多肽数据库中筛选出普通质谱信噪比不低于1500的特征多肽，即为不同动物源性肉类中高丰度蛋白质的靶标特征多肽数据库。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述前处理包括以下步骤：

A1、提取样品高丰度蛋白：向标准肉样中加入提取液和磁珠，用均质仪以1000～2600rad/min的转速均质2～5min，然后离心取上清液；

A2、向步骤A2取得的上清液中加入NH₄HCO₃和胰蛋白酶进行酶解，加入甲酸终止反应，摇匀过膜上机分析；

优选的，

步骤A1中，所述提取液为0.04～0.06mol/L Tris-HCl、5～6mol/L尿素、1～3mol/L硫脲；以2g肉样计，所述提取液的添加量为15～25mL；

和/或，步骤A1中，按照每个肉样4～6个磁珠的比例，加入适量的磁珠；

和/或，步骤A1中，所述离心的转速为10000～14000r/min，离心时间为10～30min；

和/或，步骤A2具体为：取20～100μL上清液，加入1～3mL质量分数为0.5～2％的NH₄HCO₃溶液，加入20～60μL质量浓度100μg/mL胰蛋白酶，30～45℃下酶解0.5～2h后，加入200μL质量分数为5～15％的甲酸溶液终止反应，静止10～30min，摇匀过滤膜上机分析。