[发明专利]一种测定血浆中（Z）-阿枯米定碱浓度的方法

说明书

本发明公开了一种测定血浆中（Z）‑阿枯米定碱浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的有机溶媒蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测，本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，适合于测定血浆中（Z）‑阿枯米定碱的浓度。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种测定血浆中（Z）-阿枯米定碱浓度的方法。

背景技术

（Z）-阿枯米定碱（（Z）-Akuammidine）是从马钱科胡蔓藤属植物钩吻（Gelsemiumelegans Benth.）的干燥根和根茎中分离得到的生物碱类新化合物。体外实验证明（Z）-阿枯米定碱具有显著的抗肿瘤、免疫调节、镇痛镇静等生物活性，是一种具有良好开发前景的新药源化合物。其结构式如图1所示。

目前尚未关于（Z）-阿枯米定碱体内测定方法的文献报道。本发明建立了（Z）-阿枯米定碱在大鼠体内的测定方法，通过该方法对（Z）-阿枯米定碱的药物代谢情况进行探索性研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是建立一种准确、高效测定血浆中（Z）-阿枯米定碱浓度的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种测定血浆中（Z）-阿枯米定碱浓度的方法，血浆样品经预处理后经液质联用系统检测其浓度，具体方法包括如下步骤：

（1）血浆样品预处理：取血浆样品，加入内标替硝唑甲醇溶液，加入甲醇或乙腈进行蛋白沉淀，离心后取上清液；

（2）将步骤（1）预处理后的血浆样品进行液相色谱分离：色谱条件中色谱柱为AgilentZORBAX SB-C18柱；流动相：体积比为85:15的乙腈与0.1%甲酸水溶液；流速：0.2-0.5 mL•min^-1；柱温：30-40 ℃；进样量：5 μL；洗脱方式为等度洗脱；

（3）质谱测定，条件为：离子源：电喷雾离子化电离源ESI；离子检测方式：多反应监测MRM；离子极性：正离子；离子源电压：4500 V；离子源温度：400 ℃；气帘气Curtain gas：20psi；离子源Gas 1：50 psi；离子源Gas 2：60 psi；CXP：9 V；EP：10 V；脱溶剂气和锥孔气均为高纯氮气；检测对象的离子通道：（Z）-阿枯米定碱，[M-H]+，m/z 353.3→166.1，Dwell150，DP 100，Collision Energy 40；内标替硝唑，[M-H]+，m/z 248.1→121.2，Dwell 150，DP 80，Collision Energy 20。

（4）计算：采用内标法，以（Z）-阿枯米定碱和内标替硝唑的峰面积比值代入标准曲线方程计算（Z）-阿枯米定碱的浓度。

步骤（1）中，取血浆样品50 μL，加入内标50 ng•mL^-1替硝唑甲醇溶液10 μL和200 μL甲醇或乙腈，振荡3 min，12000 rpm离心10 min，离心后取上清液。

步骤（2）中，色谱柱长度为100 mm，内径为3.0 mm，填料粒径为3.5m。

其中，所述的血浆为给予了含（Z）-阿枯米定碱药物的血浆。

其中，所述血浆为人或动物的血浆。

其中，所述血浆为大鼠血浆。

有益效果：本发明方法与现有技术相比具有如下优势：

（1）预处理方法简便：一步有机溶媒蛋白沉淀法，适用于常规测定。