[发明专利]罗氏沼虾性别分子标记引物及其应用

权利要求书

1.一种罗氏沼虾性别分子标记引物，所述引物包括引物对1，所述引物对1包括Contig-1上游引物和Contig-1下游引物，其中Contig-1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig-1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.一种罗氏沼虾性别鉴定试剂盒，其特征是包括权利要求1中的罗氏沼虾性别分子标记引物。

3.一种利用权利要求1所述引物进行罗氏沼虾性别鉴定的方法，其特征是包括以下步骤：

(1)设计引物对1；

(2)制备罗氏沼虾DNA样品；

(3)以步骤(2)中的DNA样品为模板，采用步骤(1)设计的引物对1进行PCR扩增，扩增反应结束后，进行电泳检测，若电泳结果在378bp位置处显示具有特异性DNA特异性条带，此时所检测的罗氏沼虾DNA样品为雌性罗氏沼虾，若电泳结果在378bp位置处显示不具有特异性条带，此时所检测的罗氏沼虾DNA样品为雄性罗氏沼虾。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是：步骤(2)中罗氏沼虾DNA样品制备采用柱式离心法提取获得。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征是：步骤(3)中采用引物对1进行PCR扩增时，PCR反应体系包含罗氏沼虾DNA样品50ng，Contig-1上游引物和Contig-1下游引物各0.8μL，2×Taq MasterMix 10μL，加水补足反应体系，总共20μL。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征是：步骤(3)中采用引物对进行PCR扩增时，PCR反应程序是：首先94℃预变性2min；再94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；再72℃终延伸5min。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征是：步骤(3)中进行电泳检测时，采用质量百分含量为1％的琼脂糖凝胶电泳检测扩增片段的长度。

8.权利要求1所述罗氏沼虾雌性分子标记引物、权利要求2中所述试剂盒以及权利要求3中所述方法在罗氏沼虾全雌性或全雄性育种方面的应用。