[发明专利]罗氏沼虾性别分子标记引物及其应用

说明书

本发明公开了一种罗氏沼虾性别分子标记引物，所述引物包括引物对1，所述引物对1包括Contig‑1上游引物和Contig‑1下游引物，其中Contig‑1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig‑1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。该引物能在分子水平上鉴别雌雄性罗氏沼虾。本发明还公开了一种快速鉴定罗氏沼虾性别试剂盒及方法，该方法试剂盒和方法耗时短，检测结果准确。本发明最后公开了上述引物、试剂盒以及方法在罗氏沼虾全雌性或全雄性育种方面的应用。

技术领域

本发明属于虾类性别鉴定技术，具体涉及罗氏沼虾性别分子标记引物及其应用。

背景技术

随着现代生物学技术的应用，已通过限制位点相关DNA(restriction siteassociated DNA，RAD)、扩增片段长度多态性(amplified fragment lengthpolymorphism，AFLP)和微卫星(microsatellite，SSR)等方法，开发出多种水产生物的性别特异标记，如尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)、黄颡鱼(Pelteobagrusfulvidraco)等，但是这些分子标记开发方法工作量大，耗费时间长，准确率较低。目前，通过高通量测序，然后比较雌雄性基因组差异的方法，为性别分子标记开发提供了一种新的高效手段，现已成功开发出乌鳢及大黄鱼性别特异分子标记。

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)，属于节肢动物门、甲壳纲、长臂虾科、沼虾属。生长在淡水或咸淡水中，分布于印度洋、太平洋热带及亚热带地区。其个体大，食性广，肉质鲜嫩，营养价值高，是世界上养殖产量较高的虾类品种之一。很多甲壳纲的物种表现出雌雄生长速度不一致的特点，罗氏沼虾的雄性比雌性的生长速度要快，在重量上也超过雌性。生产上将罗氏沼虾雌雄混养，雌虾在投苗2-3个月后，因为性成熟开始抱卵就不再长肉；而雄虾因为交配消耗掉营养，在生长速度和个体规格上也受到了限制。罗氏沼虾雌雄混养的形式制约了其生长，是总体产量低的主要原因。单一性别养殖方式是一种更高效的养殖方式，可以减少雌雄混养之间的能量消耗，也减少人力的分选的投入，可以获得大规格的商品虾，提高养殖的经济效益，是养殖业发展的趋势。因此，罗氏沼虾单一性别养殖方式的开展将提高其产量与品质，具有巨大的经济价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种罗氏沼虾性别分子标记引物，该引物能在分子水平上鉴别雌雄性罗氏沼虾。

本发明第二目的在于提供一种快速鉴定罗氏沼虾性别的方法，该方法耗时短，检测结果准确。

罗氏沼虾的性别由染色体决定，雌性为异型染色体(ZW)，雄性为同型染色体(ZZ)。尽管以往的染色体核型分析并没有发现明显的性染色体，但本申请发明人通过对雌雄基因组测序分析，发现雌性基因组有许多特异DNA片段。迄今为止，国内外尚无能够成功鉴定罗氏沼虾遗传性别的分子标记的报道，因此，开发一种准确鉴定遗传性别的分子标记在罗氏沼虾单性育种中具有极大的生产应用价值。

本发明的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种罗氏沼虾雌性分子标记引物，所述引物为引物对1，所述引物对1包括Contig-1上游引物和Contig-1下游引物，其中Contig-1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig-1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

具体的，各引物从5’-3’的核苷酸序列如下：

Contig-1上游引物：5’-gctgctttgaagtttgctgcatg-3’；

Contig-1下游引物：5’-tggttggtcagattgactctgta-3’。

本发明还提供了一种用于罗氏沼虾性别鉴定的试剂盒，该试剂盒包括上述罗氏沼虾雌性分子标记引物。