[发明专利]一种检测丝氨酸羟甲基转移酶活性的试剂盒以及检测方法

权利要求书

1.一种用于非诊断和/或治疗目的的丝氨酸羟甲基转移酶活性半定量检测方法，其特征在于，采用了试剂盒，所述试剂盒具有检测液、强碱溶液以及苯甲酸免疫胶体金检测试纸条，所述检测液中DL-苯基丝氨酸的浓度为20 mmol/L，磷酸吡哆醛的浓度为20 μmol/L，磷酸钾缓冲液的浓度为20 mmol/L； 所述强碱溶液为氢氧化钠溶液；

所述苯甲酸免疫胶体金检测试纸条包括金标抗体垫，带有检测线和质控线的包被膜；所述金标抗体垫上标记有苯甲酸金标抗体，所述检测线上包被有苯甲酸抗原，所述质控线上包被有羊抗兔二抗；其中，胶体金采用柠檬酸三钠还原法制得，其颗粒直径为17nm；

所述丝氨酸羟甲基转移酶活性半定量检测方法，包括以下具体步骤：

第一步，收集肝癌肝移植患者的正常肝组织，用磷酸缓冲盐水洗涤样本，洗涤三次，每次洗涤后4℃条件下4500g离心；于200μL冰冷的1×RIPA裂解缓冲液中，匀浆机制得组织匀浆；4℃、12000rpm离心20分钟，所得上清液为含丝氨酸羟甲基转移酶的细胞全蛋白样品；

第二步，向该丝氨酸羟甲基转移酶的蛋白样品中加入DL-苯基丝氨酸、磷酸吡哆醛、磷酸钾缓冲液，37 ℃ 震荡反应60分钟，形成丝氨酸羟甲基转移酶延伸反应产物；

第三步，向第二步得到的反应产物中加入强碱氢氧化钠溶液进行反应；

第四步，将反应后的混合体系使用苯甲酸免疫胶体金检测试纸条进行反应，肉眼观察显色结果。