[发明专利]一种检测丝氨酸羟甲基转移酶活性的试剂盒以及检测方法

说明书

本发明公开了一种检测丝氨酸羟甲基转移酶活性的试剂盒，具有检测液，强碱溶液以及苯甲酸免疫胶体金检测试纸条；其中检测液包括DL‑苯基丝氨酸溶液、磷酸吡哆醛和磷酸钾缓冲液；所述检测液的pH值为8.0。本发明还公开了该试剂盒在用于非治疗目的的丝氨酸羟甲基转移酶活性半定量检测方法中的应用。利用本发明试剂盒对丝氨酸羟甲基转移酶活性进行检测，方法简单、直观，操作简便、快速（5‑7分钟即可得到结果）、灵敏度高（0.156μg/mL），特异性强，无需采用实验室大型设备，肉眼即可判定结果，适用于现场筛选和快速检测，对临床疾病研究及诊断意义非凡，且具有广泛的商业开发应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其是涉及一种检测丝氨酸羟甲基转移酶活性的试剂盒，本发明还涉及该试剂盒在用于非治疗目的的丝氨酸羟甲基转移酶活性半定量检测方法中的应用。

背景技术

丝氨酸羟甲基转移酶（Serine Hydroxymethltransferase，SHMT）是一种含磷酸吡哆醛的酶，该酶基因位于17号染色体上的Smith-Magenis syndrom区域。在人体中存在两种亚型：丝氨酸羟甲基转移酶1（SHMT 1）和丝氨酸羟甲基转移酶2（SHMT 2）。胞质中以丝氨酸羟甲基转移酶1（SHMT 1）为主，线粒体中以丝氨酸羟甲基转移酶2（SHMT 2）为主。丝氨酸羟甲基转移酶是丝氨酸合成中的关键酶，包括催化丝氨酸和四氢叶酸盐可逆转化为甘氨酸和5 , 10 -亚甲基四氢叶酸盐。该反应为细胞质中蛋氨酸、胸腺嘧啶和嘌呤的合成提供了一个碳基。

近年来的研究已确认，与丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）相关的疾病包括：吡哆醇缺乏症和弯曲杆菌病等。同时也有报道丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）的表达及活性与多种肿瘤的发生发展存在显著相关性。故丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）活性的有效检测在癌症诊断和治疗中具有巨大价值。

菌源性丝氨酸羟甲基转移酶逆向酶活测定法已被认为是检测丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）活性的金标准方法。使用丝氨酸羟甲基转移酶逆向酶活测定法的原理如下：丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）可以水解 DL-苯基丝氨酸生成甘氨酸和苯甲醛，后者在 279 nm 处有特征性的强烈吸收。用多功能酶标仪测定苯甲醛A279 值，根据 A279 -苯甲醛浓度回归方程确定反应液中苯甲醛浓度。

尽管这个最常见的方法灵敏度高，但仍有许多缺点，如费时，检测时需要复杂的优化，易产生假阳性，需要有多功能酶标仪等大型实验室设备，且需要建立苯甲醛标准曲线，并且检测对象为纯化的菌源性丝氨酸羟甲基转移酶。因此寻找到一种更加便捷、灵敏度高的方法将对丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）的研究起到推动作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测丝氨酸羟甲基转移酶活性的试剂盒，利用本发明试剂盒对丝氨酸羟甲基转移酶活性进行检测，方法简单、直观，本发明还提供该试剂盒在用于非治疗目的的丝氨酸羟甲基转移酶活性半定量检测方法中的应用。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述检测丝氨酸羟甲基转移酶活性的试剂盒，具有检测液，强碱溶液以及苯甲酸免疫胶体金检测试纸条。

所述检测液包括DL-苯基丝氨酸溶液、磷酸吡哆醛和磷酸钾缓冲液；所述检测液的pH值 为 8.0。

优选的，所述检测液中DL-苯基丝氨酸的浓度为20mmol﹒L^-1，磷酸吡哆醛的浓度为20μmol﹒L^-1，磷酸钾缓冲液的浓度为20mmol﹒L^-1。

所述强碱溶液为氢氧化钠（NaOH）溶液，其浓度为0.005~1mol﹒L^-1。进一步优选，氢氧化钠溶液浓度为40mmol﹒L^-1。

所述苯甲酸免疫胶体金检测试纸条包括金标抗体垫，带有检测线和质控线的包被膜；所述金标抗体垫上标记有苯甲酸金标抗体，所述检测线上包被有苯甲酸抗原，所述质控线上包被有羊抗兔二抗。