[发明专利]一种人表皮生长因子受体2的单域抗体、检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种人表皮生长因子受体2的单域抗体、检测试剂盒及其应用，属于抗体技术领域。人表皮生长因子受体2的单域抗体，包括以下方案：A.所述单域抗体的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.5～7；B.与方案A中单域抗体的氨基酸序列相似度至少80％的多肽。本发明还提供了人源化单域抗体HpHx5A。基于该单域抗体和人源化单域抗体HpHx5A与Her2‑ECD的高亲和力，为后续单域抗体应用于检测人表皮生长因子受体2水平、肿瘤分型、乳腺癌复发与转移的早期判断及预后评估或制备预防和/或治疗由人表皮生长因子受体2引起的肿瘤的药物中的应用提供物质基础。

技术领域

本发明属于抗体技术领域，具体涉及一种人表皮生长因子受体2的单域抗体、检测试剂盒及其应用。

背景技术

研究发现致癌基因CerbB2编码一个跨膜糖蛋白，其编码基因定位于人染色体17q21。该跨膜糖蛋白分子量185KD(简称P185)，称为表皮生长因子受体2(Her2)，属于表皮生长因子受体(EGFR)家族成员之一，其细胞内段具有受体酪氨酸激酶(receptor tyrosinekinase，RTK)活性，其胞外段为配体结合域，配体与Her2受体结合后，使Her2受体自身磷酸化并激活其酪氨酸激酶活性，最终促进细胞增殖，Her2基因过度表达可导致细胞过度增殖和表型恶性转化，因而与肿瘤形成密切相关。在乳腺癌患者中，约有1/4病人的肿瘤组织为Her2表达阳性。Her2阳性的乳腺癌疾病进展速度快、恶性程度更高，对化疗耐药、化疗缓解期缩短，更容易复发和转移，预后也差。检测血清Her2蛋白水平对于肿瘤分型、乳腺癌复发与转移的早期判断及预后评估等具有重要意义，可为医师的诊断提供重要参考。但是目前缺乏与Her2蛋白亲和力强的抗体，大大限制了血清Her2蛋白水平的检测及Her2蛋白引起的肿瘤的治疗。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种人表皮生长因子受体2的单域抗体、检测试剂盒及其应用，所述单域抗体与人表皮生长因子受体2具有较高的结合亲和力，从而实现血清Her2蛋白水平的检测和相关肿瘤的治疗目的。

本发明提供了一种人表皮生长因子受体2的单域抗体，所述单域抗体包括以下方案：

A.所述单域抗体为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4；

所述FR1、FR2、FR3和FR4为框架区；所述CDR1、CDR2和CDR3为互补决定区；所述CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.5；所述CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.6；所述CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.7；

B.与方案A中所述单域抗体的氨基酸序列相似度至少80％的多肽。

优选的，方案A中FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4为单域抗体pHxA5，氨基酸序列为SEQ ID No.8。

优选的，所述单域抗体为与方案A所述单域抗体的氨基酸序列相似度至少90％的多肽。

本发明提供了一种人表皮生长因子受体2的人源化单域抗体HpHx5A，所述人源化单域抗体HpHx5A的氨基酸序列为SEQ ID No.10。

本发明提供了所述单域抗体或所述人源化单域抗体HpHx5A在制备检测人表皮生长因子受体2水平、肿瘤分型或乳腺癌复发与转移的早期判断及预后评估的试剂或试剂盒中的应用。

本发明提供了所述单域抗体或所述人源化单域抗体HpHx5A在制备预防和/或治疗人表皮生长因子受体2阳性的肿瘤的药物中的应用。

本发明提供了一种基于免疫反应技术的人表皮生长因子受体2的检测试剂盒，包含所述单域抗体或所述人源化单域抗体HpHx5A。

本发明提供了一种体外表达所述人表皮生长因子受体2的单域抗体或所述人源化单域抗体HpHx5A的方法，包括以下步骤：