[发明专利]一种通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母有效
| 申请号： | 202010760782.4 | 申请日： | 2020-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN111925952B | 公开（公告）日： | 2022-10-14 |
| 发明（设计）人： | 李伟;付建华;张志清 | 申请（专利权）人： | 广东海纳川生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/66;C12N15/90;C12N15/21;C12N15/61;C12R1/84 |
| 代理公司： | 深圳市君胜知识产权代理事务所(普通合伙) 44268 | 代理人： | 谭志鹏 |
| 地址： | 528500 广东省佛山*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 辅助 分泌 高效 表达 重组 干扰素 酵母 | ||
1.一种通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述毕赤酵母包括如SEQ ID No.1从第19位到第516位所示DNA序列的重组猪α1干扰素基因片段和如SEQ ID No.2从第10位到第1560位所示DNA序列的蛋白质二硫键异构酶PDI基因片段；所述毕赤酵母分别经过猪α1干扰素表达载体pPICZαA-pIFNa1和辅助分泌表达载体pPIC3.5K-PDI转化；所述转化后得到的菌株分别通过博来霉素、G418进行抗生素浓度梯度高拷贝筛选；所述博来霉素的浓度梯度为0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.2mg/ml、1.6mg/ml；所述G418的浓度梯度为0.4mg/ml、0.8mg/ml。
2.根据权利要求1所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述重组猪α1干扰素基因片段的插入位点为醇氧化酶基因座；所述蛋白二硫键异构酶PDI基因片段的插入位点为组氨酸合成酶基因座。
3.根据权利要求1所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述猪α1干扰素表达载体pPICZαA-pIFNa1和辅助分泌表达载体pPIC3.5K-PDI转化感受态细胞为X33毕赤酵母、GS115毕赤酵母或KM71毕赤酵母中的一种。
4.根据权利要求1所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述猪α1干扰素表达载体pPICZαA-pIFNa1是通过XhoI和XbaI双酶切pPICZαA表达质粒，电泳并切胶回收线性化载体，用T4DNA连接酶连接同样经过XhoI和XbaI双酶切处理的重组猪α1干扰素基因片段，转化Top10大肠杆菌感受态，提取质粒用XhoI和XbaI双酶切鉴定阳性重组质粒获得的。
5.根据权利要求1所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述辅助分泌表达载体pPIC3.5K-PDI是通过EcoRI和XbaI双酶切pPIC3.5K表达质粒，电泳并切胶回收线性化载体，用T4DNA连接酶连接同样经过EcoRI和XbaI双酶切处理的两端分别添加了EcoRI和NotI限制性内切酶识别序列的蛋白质二硫键异构酶PDI基因片段，转化Top10大肠杆菌感受态，提取质粒用EcoRI和XbaI双酶切鉴定阳性重组质粒获得的。
6.根据权利要求1～5任一项所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，其保藏编号为GDMCC NO.60826。
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