[发明专利]一种有效检测泪蛋白降解的方法在审
申请号: | 202010762525.4 | 申请日: | 2020-07-31 |
公开(公告)号: | CN113866250A | 公开(公告)日: | 2021-12-31 |
发明(设计)人: | 孙碧霞 | 申请(专利权)人: | 苏州三个臭皮匠生物科技有限公司 |
主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447;G01N27/48;G01N33/68;G01N21/33 |
代理公司: | 苏州简理知识产权代理有限公司 32371 | 代理人: | 杨瑞玲;杨晓东 |
地址: | 215024 江苏省苏州市工业*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 有效 检测 蛋白 降解 方法 | ||
1.一种有效检测泪蛋白降解的方法,其特征在于,其具体包括:
将被检测蛋白样本加入镜片洗护液中形成混合溶液,控制该混合溶液中被检测蛋白的理论浓度,自该混合溶液中定量取样液进行电泳解离,电泳解离完成后定量取所述样液的上样,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测所述上样中的蛋白上样量,获得表征蛋白降解量的蛋白条带,自所述蛋白条带读取蛋白上样量。
2.根据权利要求1所述的检测泪蛋白降解的方法,其特征在于,所述方法具体包括:
提供被检测蛋白样本;
将所述被检测蛋白样本加入A镜片洗护液中形成混合溶液,溶液中被检测蛋白的理论浓度为3mg/mL,取3微升上样进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,获得蛋白条带,自所述蛋白条带读取蛋白上样量为9μg;
将所述被检测蛋白样本加入A镜片洗护液中形成混合溶液,溶液中被检测蛋白的理论浓度为0.6mg/mL,自该溶液中取2毫升样液进行电泳解离,30分钟后取15微升上样进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,获得蛋白条带,自所述蛋白条带读取蛋白上样量为9μg;
将所述被检测蛋白样本加入B镜片洗护液中形成混合溶液,溶液中被检测蛋白的理论浓度为0.6mg/mL,自该溶液中取2毫升样液进行电泳解离,30分钟后取15微升上样进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,获得蛋白条带,自所述蛋白条带读取蛋白上样量为9μg。
3.根据权利要求2所述的检测泪蛋白降解的方法,其特征在于,
所述被检测蛋白样本为溶菌酶,所述溶菌酶的分子量为14Kda,
所述A镜片洗护液为0.9%NaCl溶液,
所述B镜片洗护液为含0.9%NaCl的3N专用清洁液,
将所述被检测蛋白样本加入A镜片洗护液中,溶液中被检测蛋白的理论浓度为3mg/mL,以使得被检测蛋白于0.9%NaCl溶液中浸泡跑胶,30分钟后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,获得蛋白条带,自所述蛋白条带读取蛋白上样量为9μg。
4.根据权利要求3所述的检测泪蛋白降解的方法,其特征在于,
所述方法通过加入电泳缓冲液、蛋白电泳上样缓冲液、染色液、脱色液和凝胶配合所述被检测蛋白于0.9%NaCl溶液中浸泡跑胶。
5.根据权利要求1所述的检测泪蛋白降解的方法,其特征在于,所述方法具体包括:
提供被检测蛋白样本;
将所述被检测蛋白样本加入C镜片洗护液中形成混合溶液,溶液中被检测蛋白的理论浓度为0.6mg/mL,自该溶液中取2毫升样液,30分钟后取15微升上样进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,获得蛋白条带,自所述蛋白条带读取蛋白上样量为9μg;
将所述被检测蛋白样本加入D镜片洗护液中形成混合溶液,溶液中被检测蛋白的理论浓度为0.6mg/mL,自该溶液中取2毫升样液,2小时后取15微升上样进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,获得蛋白条带,自所述蛋白条带读取蛋白上样量为9μg。
6.根据权利要求5所述的检测泪蛋白降解的方法,其特征在于,
所述被检测蛋白样本为溶菌酶,所述溶菌酶的分子量为14Kda,
所述C镜片洗护液为除蛋白组合液,
所述D镜片洗护液为除蛋白双氧水。
7.根据权利要求1所述的检测泪蛋白降解的方法,其特征在于,
将被检测蛋白样本加入镜片洗护液中形成混合溶液,控制该混合溶液中被检测蛋白的理论浓度,所述混合溶液中被检测蛋白的理论浓度大于等于0.001mg/mL。
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