[发明专利]一种快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

半抗原的制备：通过琥珀酸酐法对与硫丹具有相似结构的硫丹醇进行衍生化，引入羧基，制备得到硫丹半抗原；

完全抗原的制备：将所述硫丹半抗原通过活化酯法偶联蛋白质分别制备免疫原和包被原；

单克隆抗体的制备：用所述免疫原免疫小鼠，通过ic-ELISA法检测筛选，进行细胞融合，得到硫丹单克隆抗体；

胶体金免疫层析试纸的制备：将所述二抗涂在硝酸纤维素膜上作为质控线，将所述包被原喷涂在硝酸纤维素膜作为检测线，再按照试纸条的结构进行组装。

2.根据权利要求1所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述半抗原的制备方法具体为：

将硫丹醇充分溶解于吡啶，加入丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶，旋转蒸发，加入纯水溶解沉淀物，加入NaOH溶液将pH调至9～10，用正己烷萃取，收集所有的水相，用HCl溶液将水相溶液pH调至3～4，有固体析出，过滤和烘干后得到的产物即为硫丹半抗原。

3.根据权利要求2所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述HCl溶液和NaOH溶液的浓度为1M。

4.根据权利要求2所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述硫丹醇、吡啶、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶的用量比为20～50mg：1～3mL：8～20mg：1～3mg。

5.根据权利要求1所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述完全抗原的制备是将所述半抗原通过活化酯法偶联牛血清白蛋白制备免疫原，将半抗原通过活化酯法偶联鸡卵白蛋白制备包被原，具体为：

将硫丹半抗原溶解于二甲基甲酰胺中，加入N-羟基琥珀酰亚胺NHS和1-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC，室温反应进行活化，得到已经活化的硫丹半抗原；

将牛血清白蛋白BSA和鸡卵清白蛋白OVA分别溶解于碳酸盐缓冲液CBS中，将所述已经活化的硫丹半抗原逐滴加到牛血清白蛋白BSA和鸡卵清白蛋白OVA溶液中，室温反应，用磷酸盐缓冲PBS透析，分别得到免疫原和包被原。

6.根据权利要求5所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，在所述硫丹半抗原的活化过程中，所述硫丹半抗原、N-羟基琥珀酰亚胺NHS和1-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC的用量摩尔比为1：2～3：2～3。

7.根据权利要求5所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，在所述免疫原和包被原的制备过程中，所述牛血清白蛋白BSA、鸡卵清白蛋白OVA和硫丹半抗原的用量摩尔比为30～50：30～50：1。

8.根据权利要求1所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述胶体金免疫层析试纸条的制备具体包括以下步骤：

所述胶体金免疫层析试纸条包括样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板，将硝酸纤维素膜贴在底板的中间，吸水垫和样品垫分别贴在底板的上下两边，将所述二抗涂在硝酸纤维素膜上作为质控线，将所述包被原喷涂在硝酸纤维素膜作为检测线，制备得到胶体金免疫层析试纸条。

9.一种快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，根据权利要求1～8任意一项所述检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法制备。

10.一种根据权利要求9所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条的检测方法，其特征在于，将所述单克隆抗体标记胶体金得到金标抗体，将待测硫丹样本提取液与所述金标抗体孵育5min，插入所述胶体金免疫层析试纸条，3min后进行判读检测结果。