[发明专利]一种测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法

权利要求书

1.一种测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于，基于IAC-HPLC-MS/MS法，其具体步骤为：

(1)样品提取，取柏子仁样品，液氮研磨后，提取、稀释、过滤、收集上清液；

(2)净化洗脱，取上清液注入免疫亲和柱中；待液体排干后，用水洗涤，弃去全部洗脱液；待液体排干后，加入甲醇，收集洗脱液并定容；洗脱液用滤膜过滤后转移至液相小瓶中作为待测样品备用；

(3)建立标准曲线，将黄曲霉毒素混标对照品用甲醇稀释成不同浓度的黄曲霉毒素混标溶液，过滤，利用HPLC-MS/MS法进行测定，以峰面积为纵坐标，以四种黄曲霉毒素质量浓度为横坐标建立标准曲线，计算线性方程；

(4)测定待测样品，将各化合物峰面积代入相应标准曲线，计算样品浓度；

所述的黄曲霉毒素为AFB₁、AFG₁、AFB₂和AFG₂；

所述的色谱条件为：色谱柱：HALO 90A C18色谱柱，2.1×100mm，2.7um；流动相：A相为含0.1％的甲酸水溶液，B相为甲醇；柱温：40℃，进样量：3ul，流速：0.25ml·min^-1；梯度洗脱程序如下：0.00-6.00min，62％-30％A，6.00-6.20min，30％-0％A；6.20-10.00min，0.00％A；

所述的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源(ESI)，扫描类型：正离子扫描，扫描模式：多反应监测模式(MRM)，干燥气温度：300℃，干燥气流速：10L·min^-1，雾化气压力：35psi，毛细管电压：4000V，四种黄曲霉毒素的相关质谱参数如下：

a：离子模式b:碎裂电压c：碰撞能。

2.根据权利要求1所述的一种测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体过程为：取柏子仁样品，液氮研磨，精密称取5g柏子仁粗样于50ml离心管中，加入1g氯化钠和25ml 70％的甲醇溶液混匀，振荡，涡旋5min，离心3min，离心转速2500r/min；取10ml上清液加入40ml 1％的吐温水溶液稀释，用快速定量滤纸过滤，并收集滤液作为上清液，待净化洗脱。

3.根据权利要求1所述的一种测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于，所述步骤(2)的具体过程为：取25ml上清液注入免疫亲和柱中；待液体排干后，用10ml水洗涤2次，弃去全部洗脱液；待液体排干后，加入1ml甲醇，收集洗脱液并定容至1ml；洗脱液用0.22um滤膜过滤后转移至液相小瓶中利用安捷伦高效液相色谱串联三重四级杆质谱仪进行分析。

4.根据权利要求1所述的一种测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于，所述黄曲霉毒素混标对照品AFB₁和AFG₁质量浓度均为1.0mg·L^-1，AFB₂和AFG₂质量浓度均为0.3mg·L^-1。