[发明专利]一种测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法

说明书

本发明属于黄曲霉毒素含量检测技术领域，具体涉及一种测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法，基于IAC‑HPLC‑MS/MS法，将柏子仁样品液氮研磨后进行提取，净化洗脱后采用特定的色谱条件进行测定，本发明经方法学验证，灵敏度高，重现性好，实现了柏子仁中四种黄曲霉毒素AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂含量的同时测定，四种成分能够完全分离且峰形美观。

技术领域

本发明属于黄曲霉毒素含量检测技术领域，具体涉及一种测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法。

背景技术

黄曲霉毒素(AFs)是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌相互作用产生的一类次级代谢产物，主要包括黄曲霉毒素B₁(AFB₁)、黄曲霉毒素B₂(AFB₂)、黄曲霉毒素G₁(AFG₁)、黄曲霉毒素G₂(AFG₂)、黄曲霉毒素M₁(AFM₁)和黄曲霉毒素M₂(AFM₂)。AFM₁和AFM₂主要存在于动物和乳制品中。中药材中主要含有AFB₁，AFB₂，AFG₁和AFG₂。其中，AFB₁具有最强的致癌性和毒性，而毒性尤为显着，是三氧化二砷的68倍，氰化钾的10倍，甚至三聚氰胺的416倍。它很容易对人和动物的肝脏组织造成损害，在严重的情况下甚至会导致肝癌甚至死亡。此外，暴露于较高浓度的黄曲霉毒素中可导致急性黄疸，肝衰竭和死亡。2002年，AFB₁被国际癌症研究机构(IARC)列为I类强致癌物。从中药材的种植、收获、晾晒到加工、储藏、运输环节，若条件控制不好，容易滋生霉菌，甚至产生黄曲霉毒素，一些药材如柏子仁、酸枣仁等含丰富油脂，污染现象更为严重。而且污染后的黄曲霉毒素难以彻底消除，因此必须及时检测及时防控。2020版《中国药典》规定了19种中药材黄曲霉毒素限量标准，严格把控药材中黄曲霉毒素污染问题。

柏子仁，为柏科植物侧柏Platycladus orientalis(L.)Franco的干燥成熟种仁，具有养心安神、润肠通便、止汗的功效。现代化学成分研究表明，柏子仁含有脂类、氨基酸、皂苷、萜类和多糖等有效成分；现代药理活性研究表明，柏子仁具有镇静安神、抗抑郁、改善阿尔茨海默病、治疗不孕症等作用。柏子仁全国各地均产，主产于安徽、山东、陕西、河南等地，八九月份成熟，但受高温高湿天气等影响，使得部分柏子仁药材采收后便已滋生真菌，甚至已产生黄曲霉毒素等真菌毒素。而且后续晾晒、生产加工、储藏、运输等过程同样有可能产生黄曲霉毒素等真菌毒素。2020版《中国药典》规定柏子仁中AFB₁不得高于5μg·kg^-1、黄曲霉毒素总量(AFB₁+AFB₂+AFG₁+AFG₂)不得高于10μg·kg^-1。

发明内容

本发明提出了一种测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法，本发明基于IAC-HPLC-MS/MS法，实现了柏子仁中四种黄曲霉毒素AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂的同时测定，本发明灵敏度高，重现性好，四种成分能够完全分离且峰形美观。

本发明所述的测定柏子仁中黄曲霉毒素含量的方法基于IAC-HPLC-MS/MS法，其具体步骤为：

(1)样品提取，取柏子仁样品，液氮研磨后，提取、稀释、过滤、收集上清液；

(2)净化洗脱，取上样液注入免疫亲和柱中；待液体排干后，用水洗涤，弃去全部洗脱液；待液体排干后，加入甲醇，收集洗脱液并定容；洗脱液用滤膜过滤后转移至液相小瓶中作为待测样品备用；