[发明专利]一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒

权利要求书

1.一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括细粒棘球绦虫重组抗原EG95蛋白预包被酶标板、血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液；细粒棘球绦虫重组抗原EG95是通过以下方法制备的：首先PCR扩增EG95基因片段，并引入Xho I和EcoR Ⅰ酶切位点，然后采用EcoR Ⅰ和Xho I同时酶切PCR产物和真核表达载体pGAPZαA，胶回收目的片段和载体，然后进行连接，构建重组质粒pGAPZαA-EG95，再将重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168菌株感受态细胞中，经含Zeocin的YPD培养基筛选，然后经甘油诱导表达，并经蛋白层析技术纯化。

2.如权利要求1所述的牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：抗原包被的方法：将纯化的重组蛋白EG95用包被缓冲液稀释至10μg/mL，包被酶标板，每孔加100μL，4℃过夜，用洗涤液洗涤3次，每次2min；然后加入含质量分数5％脱脂奶粉的PBS封闭液，每孔加200μL，37℃孵育2h，随后用洗涤液洗涤3次，每次2min，真空包装后置于4℃保存备用。

3.如权利要求1所述的牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述血清稀释液为含BSA和0.5‰Tween-20的磷酸盐缓冲液，血清稀释度为1:100。

4.如权利要求1所述的牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述阴性对照液为健康未免疫棘球蚴EG95疫苗的牛血清，所述阳性对照液为含有EG95抗体的牛血清。

5.如权利要求1所述的牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述酶标记结合物为辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG酶标抗体，所述酶标记结合物稀释度为1:10000。

6.如权利要求1所述的牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述洗涤液为含质量分数0.5‰Tween-20的磷酸盐缓冲液。

7.如权利要求1所述的牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述底物显色液的配方为：每500mL去离子水加乙二胺四乙酸二钠0.2g、柠檬酸0.95g、甘油50mL、TMB粉末0.15g。

8.如权利要求1所述的牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述终止液为2mol/L的硫酸溶液。