[发明专利]一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，包括细粒棘球绦虫重组抗原EG95蛋白预包被酶标板、血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液；细粒棘球绦虫重组抗原制备过程中在EG95基因采用Xho I和EcoRⅠ同时酶切PCR产物和真核表达载体pGAPZαA，胶回收目的片段和载体后进行连接，构建重组质粒pGAPZαA‑Eg95，再将重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168菌，连续经含100μg/mL和200μg/mL Zeocin的YPD培养基筛选，然后经甘油诱导表达。本发明采用真核表达系统获得的重组蛋白EG95用于创制牛棘球蚴病抗体检测试剂盒，具有特异性强、敏感性高、重复性好、易于操作优点。

技术领域

本发明属于基因工程技术和诊断试剂技术领域，尤其涉及一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒。

背景技术

棘球蚴病(echinococcosis)，俗称包虫病，是由棘球属绦虫的幼虫——棘球蚴寄生于动物(包括人)的肝、肺等组织而引起的一种危害严重的人兽共患寄生虫病，是全球性重要公共卫生问题之一。棘球蚴病被世界动物卫生组织(OIE)归为全球通报的传染性疫病，被世界卫生组织(WHO)列为17种被忽视的热带病(Neglected tropical diseases,NTDs)之一。棘球蚴病不仅影响着发展中国家和地区的贫困人群，而且对一些国家或地区动物及动物产品国际贸易构成了障碍。

在棘球蚴病防治中，关键环节在于控制动物棘蚴病传染源、切断生活史循环链。一方面，需要管控棘球蚴病变牛、羊内脏饲喂犬等食肉动物，同时，对流行区牛、羊进行免疫预防。另一方面，要按照“犬犬驱虫、月月投药”的方案对流行区犬等终末宿主进行全面的驱虫管理。

Lightowlers等人研制了抗细粒棘球绦虫虫卵感染的EG95基因工程亚单位重组抗原疫苗，是目前控制棘球蚴病的有效疫苗，且临床试验证实其能够用于动物的免疫预防，但多采用原核表达系统表达的重组蛋白构建的试剂盒对其免疫效果进行检测，其特异性和灵敏性较差，非特异性反应明显。目前尚无报道针对牛棘球蚴病疫苗免疫抗体评价的试剂盒。基于用真核表达系统(如毕赤酵母表达系统)表达的EG95蛋白建立的检测方法和试剂盒目前未见报道。因而研发易于操作的、特异性强、敏感性高的牛棘球蚴病疫苗免疫抗体检测试剂盒，对评价和推广牛棘球蚴病疫苗，以控制棘球蚴病的流行具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，能够用于牛棘球蚴病疫苗免疫抗体的定性检测，具有特异性强、敏感性高、重复性好、易于操作的优点。

本发明的技术方案：一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，该试剂盒包括细粒棘球绦虫重组抗原EG95蛋白预包被酶标板、血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液；细粒棘球绦虫重组抗原EG95是通过以下方法制备的：首先PCR扩增EG95基因片段(碱基序列为：