[发明专利]一种人胚胎干细胞诱导分化成间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种hESC诱导分化成MSCs的方法，其特征在于，由以下步骤组成：

1）hESC在PS诱导培养基中培养，获得PS细胞；所述的PS诱导培养基由mTeSR1 noselected factors、20~35ng/mL激活素A、2~5μM CHIR99021、15~20ng/mL bFGF、20~100nMPIK90组成，培养时间为24小时；

2）PS细胞在外侧中胚层诱导培养基中培养，获得外侧中胚层细胞；所述的外侧中胚层诱导培养基由mTeSR1 no selected factors、0.5~1.5μM A-83-01、200~300nM LDN-193189、10~20ng/mL BMP4、2~4μM CHIR99021、15~25ng/mL bFGF组成，培养时间为2天；

3）外侧中胚层细胞在MSCs诱导培养基中培养，获得MSCs；所述的MSCs诱导培养基由低糖DMEM、10% FBS、1%青霉素-链霉素溶液、1~5mM谷氨酰胺、5~10ng/ml bFGF、3~8ng/mlPDGF-AB、8~15ng/ml EGF、20~50μg/ml抗坏血酸组成，培养时间为3-6天；

步骤1）完成后，采用免疫荧光染色显示，检测多能性标志物OCT4和PS细胞标志物T的表达量，判断PS细胞诱导效果；步骤2）完成后，采用免疫荧光染色显示，检测外侧中胚层标志物HAND1的表达量，判断外侧中胚层细胞诱导效果。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）还包括：

a）将hESC 用Accutase解离成单细胞；

b）1：10接种在基质胶Matrigel包被的6孔板中，每孔含2ml的mTeSR1培养基，其中TeSR1培养基中添加有ROCK抑制剂Y-27632；

c）培养过夜，清洗。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）还包括经MSCs传代培养基培养，获得成熟的MSCs，其中的MSCs传代培养基包括低糖DMEM，FBS，青霉素-链霉素溶液和谷氨酰胺。