[发明专利]连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法

权利要求书

1.连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法，其特征在于包括（1）牦牛皮前处理，（2）匀浆，（3）酶解，（4）离心分离，（5）脱色、脱腥、脱盐，（6）浓缩干燥步骤，所述步骤（3）酶解包括：

第一次酶解：于步骤（2）匀浆得到的牦牛皮浆液中加入胃蛋白酶，之后于真空度0.85～0.98 MPa、转速15～60 r/min、温度35～40℃下进行旋蒸脱溶酶解4 h，得第一次酶解液；

超微细化处理：将第一次酶解液灭酶，之后过200目筛，之后收集筛下液采用纳米对撞机进行超微细化处理，使处理后的筛下液的平均粒径小于500 nm，得纳米化酶解液；

第二次酶解：调整纳米化酶解液的pH至9，加入碱性蛋白酶和弹性蛋白酶，之后于真空度0.85～0.98 MPa、转速15～60 r/min、温度50℃下进行旋蒸脱溶酶解2 h。

2.如权利要求1所述的连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法，其特征在于所述步骤（1）牦牛皮前处理具体为：称取新鲜牦牛皮，脱毛后切碎，于室温下按料液质量比为1:3～7 kg/kg加入质量浓度为3%~5%的纯碱浸泡6~8 h，浸泡结束后清水洗净牦牛皮至中性，之后将牦牛皮按料液质量比为1:3～7 kg/kg加入至质量浓度为3%~5%食盐中再次浸泡6~8 h，浸泡结束后，清水洗净牦牛皮呈中性。

3.如权利要求1所述的连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法，其特征在于所述步骤（2）匀浆具体为：将前处理后的牦牛皮按料液质量比为1:4～8 kg/kg加入0.05 M的醋酸溶液用胶体磨进行充分匀浆，制得牦牛皮匀浆液。

4.如权利要求1所述的连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法，其特征在于所述步骤（4）离心分离具体为：将步骤（3）酶解结束后的酶解液高温煮沸进行灭酶和杀菌，之后于8000～12000 rpm的条件下离心除去残渣，微滤后得到胶原蛋白肽酶解液。

5.如权利要求1所述的连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法，其特征在于所述步骤（5）脱色、脱腥、脱盐具体为：于步骤（4）离心分离后得到的胶原蛋白肽酶解液中加入0.1%~0.3% m/v的活性炭，室温下40～80 r/min搅拌2~3 h，之后抽滤去除活性炭，再经离子交换树脂柱进一步脱色、脱盐、脱腥。

6.根据权利要求1所述的连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法，其特征在于：所述步骤（1）的牦牛皮为青海柴达木盆地牦牛皮。

7.根据权利要求1所述的连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法，其特征在于：所述步骤（3）中第一次酶解使用的胃蛋白酶为从动物粘膜提取的食品级蛋白酶；所述步骤（3）中第二次酶解使用的碱性蛋白酶为地衣芽孢杆菌中提取的食品级蛋白酶，弹性蛋白酶为胰脏中提取的食品级蛋白酶。

8.根据权利要求5所述的连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法，其特征在于：所述的活性炭为200目的木质活性炭，所述离子交换树脂采用强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂和大孔丙烯酸系弱碱阴离子交换树脂。

9.根据权利要求1～8任一所述的连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法，其特征在于：所述方法制得的牦牛皮小分子胶原蛋白肽中，分子量小于3000 Da的胶原蛋白肽的含量大于95%，分子量小于2000 Da的寡肽含量大于90%，分子量小于1000 Da的寡肽含量大于70%。